Temat: LC-MS - Prolib Integro

Skocz do pozycji: 1.

Tytuł:: Analysis of alternative biological materials for the purposes of medical and toxicological expertise using the LC-MS
Analiza alternatywnych materiałów biologicznych na potrzeby ekspertyzy medyczno-toksykologicznej z wykorzystaniem metody LC-MS
Autorzy:: Szczurek, Justyna
Opis:: Celem niniejszej pracy była walidacja metody oznaczania pięciu leków z grupy SSRI i SNRI (citalopram, fluoksetyny, paroksetyny, sertraliny, wenlafaksyny) w płynie z jamy ustnej oraz pięciu leków z grupy benzodiazepin (alprazolamu, diazepamu, estazolamu, klonazepamu, tetrazepamu) w próbkach łez, opartych na MEPS/UHPLC-MS. W ramach procesu walidacji wyznaczono takie parametry jak: zakres liniowości, granicę wykrywalności i oznaczalności, dokładność, precyzję, efekt matrycy oraz selektywność. Na podstawie otrzymanych danych stwierdzono, iż metody pozwalają na uzyskanie wyników dokładnych i precyzyjnych. Wyjątek stanowiła sertralina, dla której na średnim i wysokim poziomie stężeń nie udało się uzyskać dokładnych wyników.Po uzyskaniu zadowalających wyników parametrów walidacyjnych sprawdzono metodę poddając analizie próbki naturalne. Próbki płynu z jamy ustnej pochodziły od pacjentów leczonych w Zakładzie Zaburzeń Afektywnych Katedry Psychiatrii UJ CM, natomiast próbka płynu łzowego od pacjentki leczonej alprazolamem. Wykonane badania potwierdziły, iż możliwe jest wykorzystanie zwalidowanych metod do oznaczania wybranych leków z grupy SSRI, SNRI i benzodiazepin, odpowiednio w płynie z jamy ustnej i łzach, na niskim poziomie stężeń, na potrzeby ekspertyzy medyczno-toksykologicznej. Ponadto zastosowane metody pozwalają na redukcję efektu matrycy w badanych próbkach.
The aim of this study was to validate the methods for determination of five drugs from the group of SRRI and SNRI (citalopram, fluoxetine, paroxetine, sertraline venlafaxine) in human oral fluid and five drugs from the group of benzodiazepines (alprazolam, clonazepam, diazepam, estazolam, tetrazepam) in lachrymal fluid, based on MEPS/UHPLC-MS. The validation process involved determination of the following parameters: linearity, limit of detection, limit of quantification, accuracy, precision, matrix effect and selectivity. It was found that the methods allow to obtain accurate and precise results. An exception was the sertraline for which accurate results could not be achieved on medium and high concentration levels.After obtaining satisfactory values of the validation parameters the methods were tested by analysis of natural samples. The samples of oral fluid originated from the patients treated in Department of Affective Disorders, Psychiatric Department UJ CM, and the lachrymal fluid sample was obtained from the patient treated with alprazolam. Based on obtained data it was confirmed that the validated methods may be used to determine drugs from the groups of SRRI, SNRI and benzodiazepines at low concentrations in oral fluid and lachrymal fluid, respectively. Therefore, presented methods may be suitable for the purposes of medical and toxicological expertise.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 2.

Tytuł:: Opracowanie i walidacja metody oznaczania kwasów tłuszczowych z zastosowaniem systemu LC/MS/MS
Development and validation of a method for the determination of fatty acids using LC/MS/MS
Autorzy:: Bator, Karolina
Opis:: The aim of this study was to develop a method for the simultaneous determination of selected thirty-two fatty acids using ultra high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) and to determine the range of linearity for samples prepared in artificial plasma. The subjects of the study were compounds from three families: saturated, monounsaturated and polyunsaturated fatty acids. For purification of the samples the method of protein precipitation with an organic reagent was chosen, using methanol as a precipitating agent. For comparison, purification of samples by liquid-liquid extraction with solvent evaporation under nitrogen atmosphere was also carried out. Optimization of mass detection and chromatographic analysis parameters was carried out. Chromatographic analysis was initially carried out using a mixture of methanol and water with the addition of 1% ammonium acetate as a proton acceptor. Then the mobile phase was changed to a mixture of acetonitrile and water with the addition of 1% ammonium acetate. Chromatographic separation of the studied compounds was performed on an Acquity UPLC BEH C18 column (1.7 µm, 2.1 x 50 mm) using gradient elution. Separation of analytes was achieved in less than four minutes. The retention times of the acids were within a narrow range of 2.46 to 3.36 minutes. The linear dependence of detector response on analyte concentrations was determined according to FDA guidelines. A calibration curve was established for all compounds using samples in the concentration range of 0.625-10.00 µg/ml. Monounsaturated and polyunsaturated fatty acids showed satisfactory linearity, with correlation coefficients in the range 0.9436 - 0.9989. Saturated fatty acids with the exception of nonadecanoic acid did not show linearity, probably due to the mismatched sample purification method. The developed method requires refinement of the sample preparation process and further validation steps to enable its application to the qualitative and quantitative determination of fatty acids in biological samples.
Celem pracy było opracowanie metody jednoczesnego oznaczania wybranych trzydziestu dwóch kwasów tłuszczowych z zastosowaniem ultrasprawnej chromatografii cieczowej sprzężonej z tandemową spektrometrią mas (LC/MS/MS) oraz określenie zakresu liniowości dla próbek sporządzonych w sztucznym osoczu. Przedmiotem badań były związki z trzech rodzin, tj. kwasów tłuszczowych nasyconych, jednonienasyconych oraz wielonienasyconych. Do oczyszczania próbek wybrano metodę strącania białka odczynnikiem organicznym, stosując metanol, jako czynnik strącający. Dla porównania przeprowadzono także oczyszczanie próbek metodą ekstrakcji typu ciecz-ciecz z odparowaniem rozpuszczalnika w atmosferze azotu. Przeprowadzono optymalizację parametrów detekcji masowej oraz analizy chromatograficznej. Analizę chromatograficzną prowadzono początkowo stosując mieszaninę metanolu i wody z dodatkiem 1% roztworu octanu amonu, jako akceptora protonów. Następnie fazę ruchomą zmieniono na mieszaninę acetonitrylu i wody z dodatkiem 1% octanu amonu. Rozdzielenie chromatograficzne badanych związków wykonano na kolumnie Acquity UPLC BEH C18 (1.7 µm, 2.1 x 50 mm) z zastosowaniem elucji gradientowej. Uzyskano rozdzielenie analitów w czasie mniejszym niż cztery minuty. Czasy retencji oznaczanych kwasów mieściły się w wąskim zakresie od 2,46 do 3,36 minut. Liniową zależność odpowiedzi detektora od stężenia analitów wyznaczono według wytycznych FDA. Dla wszystkich związków wyznaczono krzywą kalibracyjną w zakresie stężeń 0,625-10,00 µg/ml. Zadowalającą liniowością charakteryzowały się kwasy jednonienasycone i wielonienasycone, dla których współczynniki korelacji mieściły się w zakresie 0,9436 - 0,9989. Kwasy tłuszczowe nasycone z wyjątkiem kwasu nonadekanowego nie wykazały liniowości, prawdopodobnie z powodu nieodpowiedniej metody oczyszczania próbek. Opracowana metoda wymaga dopracowania procesu przygotowywania próbek oraz przeprowadzenia dalszych etapów walidacji, w celu umożliwienia jej zastosowania do oznaczeń jakościowych i ilościowych kwasów tłuszczowych w próbkach biologicznych.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 3.

Tytuł:: Badanie farmakokinetyki nowego związku ww7/14 o działaniu przeciwpadaczkowym u myszy
Pharmacokinetics of novel compound ww7/14 with anticonvulsant activity in mice
Autorzy:: Pudełko, Damian
Opis:: Celem badań była ocena właściwości farmakokinetycznych nowego związku ww7/14 o działaniu przeciwpadaczkowym u myszy. Substancja ta jest pochodną N-((2,5-dimetylofenoksy)alkilo)aminoalkanoli zsyntetyzowanych i badanych pod kątem działania przeciwdrgawkowego.W ramach przeprowadzonych badań in silico oceniono profil farmakokinetyczny i właściwości biofarmaceutyczne związków ww7/14, ww4/14, A1/14, A2/14 za pomocą programu ADMET Predictor™ (Simulations Plus, Inc.). Wygenerowane parametry pomogły w dogłębnej analizie substancji pod kątem przewidywanych właściwości ADME/T oraz zostały porównane z wytycznymi „reguły pięciu” Lipińskiego. Wszystkie badane analogi mieściły się w wytycznych „reguły pięciu”. Badania uzupełniono o struktury chemiczne potencjalnym metabolitów otrzymanych za pomocą programu Pallas (CompuDrug). Zaobserwowano powstawanie dużej ilości metabolitów, co może być przyczyną znacznego efektu pierwszego przejścia tych substancji w wątrobie lub w ścianie jelita, a w efekcie końcowym niskiej biodostępności badanych analogów.Z uwagi na najsilniejsze działanie hamujące wobec receptorów 5-HT1A, 5-HT2B, oraz hamowanie transportera 5-HT do badań in vivo wybrano związek ww7/14. Opracowano i zwalidowano metodę oznaczania ww7/14 z zastosowaniem systemu LC/MS/MS w osoczu i mózgu myszy, zgodnie z wytycznymi FDA oraz EMA. Granica oznaczalności dla badanego związku we wszystkich matrycach wynosiła 1+-0.2 ng/mL, z kolei granica wykrywalności była równa 0.5 ng/mL.Wszystkie parametry farmakokinetyczne dla badanego związku obliczono techniką bezmodelową za pomocą programu komputerowego Phoenix WinNonlin (Pharsight, Sunnyvale, C.A. USA). Badana substancja cechuje się bardzo niską dostępnością biologiczną, F = 3% po podaniu dożołądkowym oraz F = 7% po podaniu dootrzewnowym. Analiza stężeń związku w tkance mózgowej wykazała dobre przenikanie substancji przez barierę krew-mózg myszy.
The aim of the study was to evaluate the pharmacokinetics of novel antiepileptic compound ww7/14 in mice. This substance is a representative of N-((2,5-dimethylphenoxy)alkyl)aminoalkanol derivatives and has been synthesized and tested for antiepileptic properties.In the first stage of the study, in silico pharmacokinetic and biofarmaceutical profiles of ww7/14, ww4/14, A1/14 and A2/14 have been established, using ADMET Predictor™ (Simulations Plus, Inc.). The generated parameters helped in the in-depth ADME/T properties analysis of compounds and were compared with the guidelines of Lipiński’s ‘rule of five’. All tested compounds resulted in positive score of Lipiński's rule. What is more, in silico study has been supplemented by chemical structures of potential metabolites, which have been obtained using the Pallas (CompuDrug) software. A large amount of metabolites has been observed, which may cause significant first-pass effect of these substances in the liver or intestinal wall and finally result in low bioavailability.Due to the strongest inhibitory effect on 5-HT1A, 5-HT2B and inhibition of 5-HT transporter, compound ww7/14 has been selected for in vivo study. According to the FDA and EMA procedures, bioanalytical method has been developed and validated for the determination of ww7/14, using LC-ESI/MS/MS system in mice’s plasma and brain. The quantitation and detection limits of ww7/14, in all matrices, were respectively 1+-0.2 ng/mL and 0.5 ng/mL.All data in pharmacokinetic experiments were processed with the pharmacokinetics software Phoenix WinNonlin (Pharsight, Sunnyvale, C.A. USA), according to non-compartmental analysis. Compound ww7/14 is characterized by very low bioavailability, which were 3% and 7%, respectively after intragastric and intraperitoneal administration. The concentrations of compound in the brain tissue showed a good penetration through the blood-brain barrier of mice.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 4.

Tytuł:: Badanie metabolizmu nowych związków o właściwościach stabilizujących potencjał błony komórkowej techniką LC/MS/MS
Study of the metabolism of new compounds on the properties of the cell membrane stabilizing potential with the technique LC / MS / MS
Autorzy:: Nowak, Sylwia
Opis:: Celem pracy była identyfikacja metabolitów nowych związków, potencjalnych leków o działaniu stabilizującym błony komórkowe. Badane substancje KM314 oraz KM416 podawano szczurom dożołądkowo w dawkach ED50. W próbkach moczu, krwi oraz narządów wewnętrznych oznaczano potencjalne metabolity badanych związków, wygenerowane wcześniej in silico z zastosowaniem programu komputerowego Pallas. Dla związku KM314 program komputerowy Pallas zaproponował struktury 17 potencjalnych metabolitów mogących powstać w organizmie zwierzęcym w wyniku efektu pierwszego przejścia. Badania in vivo potwierdziły obecność 15 spośród nich, które umownie nazwano: M1, M2, M3, M5, M6, M7, M8, M9, M10, M11, M13, M14, M15, M16, M17. Dla związku KM416 program komputerowy Pallas zaproponował struktury 15 potencjalnych metabolitów mogących powstać w organizmie zwierzęcym w wyniku efektu pierwszego przejścia. Zidentyfikowano 8 spośród 15 potencjalnych metabolitów związku KM416, które umownie nazwano M1, M3, M4, M7, M8, M9, M10, M15.
The aim of this study was the identification of the metabolites of new substances, potential drugs with the activity stabilizing the cell membrane. The studied compounds KM314 and KM416 were administered intragastrically at the dose of ED50. Then in the urine, blood and some tissue were determined potential metabolites of tested substances, which were earlier generated in silico by the Pallas.For the KM314 computer program Pallas made 17 structures of potential metabolites which could be formed in the animal by first pass effect. In vivo research confirmed 13 of them, which were called: M1, M2, M3, M5, M6, M7, M8, M9, M10, M11, M13, M14, M15, M16, M17.For the KM314 computer program Pallas made 15 structures of potential metabolites which could be formed in the animal by first pass effect. In vivo research confirmed 8 of them, which were called: M1, M3, M4, M7, M8, M9, M10, M15.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 5.

Tytuł:: Application of the liquid chromatography – mass spectrometry technique for determination of benzodiazepines
Zastosowanie techniki chromatografii cieczowej sprzężonej ze spektrometrią mas do oznaczania benzodiazepin
Autorzy:: Nowak, Julia
Opis:: Celem pracy była optymalizacja warunków pracy ultrawysokosprawnego chromatogramu cieczowego sprzężonego ze spektrometrem mas ESI-qTOF pod kątem uzyskania jak najniższych granic wykrywalności i oznaczalności benzodiazepin (alprazolamu, diazepamu, estazolamu, klonazepamu lorazepamu, lormetazepamu i tetrazepamu) w próbkach biologicznych pochodzenia ludzkiego, takich jak: włosy, surowica i krew. Optymalizację pracy źródła jonów ESI wykonano przy pomocy pięcioczynnikowego planu Doehlerta, natomiast pozostałe parametry pracy spektrometru mas zoptymalizowano metodą jednej zmiennej. Opracowano metodę chromatograficzną umożliwiającą rozdzielenie mieszaniny benzodiazepin w ciągu piętnastu minut. Próbki biologiczne włosów, krwi i surowicy przygotowano z zastosowaniem metody ekstrakcji ciecz-ciecz wspomaganej mikrofalami. Metodę poddano walidacji, określając liniowość, granice wykrywalności i oznaczalności, precyzję oraz dokładność. Uzyskano granice wykrywalności w zakresie: 0,05-0,11 ng/mg dla włosów, 1,9-7,7 ng/ml dla krwi i 0,3-33,3 ng/ml dla osocza. Opracowaną metodę z powodzeniem zastosowano do analizy materiałów referencyjnych (liofilizowana surowica ludzka) oraz próbek naturalnych: włosów oraz krwi.
The aim of this study was optimize the working conditions of an ultra high performance liquid chromatography combined with ESI-qTOF mass spectrometry in order to achieve the lowest limits of detection and quantification of benzodiazepines (alprazolam, diazepam, estazolam, clonazepam, lorazepam, lormetazepam and tetrazepam) in human biological samples, such as: hair, serum and whole blood. The ESI working conditions were optimized according to the Doehlert design, while other working parameters of a mass spectrometer were optimized by a single-variable optimization. A chromatographic method enabling separation of benzodiazepines in fifteen minutes was developed. Biological samples of hair, whole blood, serum were prepared using the microwaves-assisted liquid-liquid extraction technique. Method validation was performed in terms of: linearity, detection and quantification limits, precision and accuracy. The quantification limits ranged from: 0.05 to 0.11 ng/mg for hair, 1.9-7.7 ng/ml for whole blood and 0.3-33.3 ng/ml for serum. The method was successfully applied for analysis of reference materials (lyophilized human serum) and real-cases samples of hair and whole blood.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 6.

Tytuł:: Development of a method for determining xenobiotics in the form of dried blood spots on cotton material and Whatman® 903 cards
Opracowanie metody oznaczania ksenobiotyków w postaci suchych plam krwi na materiale bawełnianym oraz kartach Whatman® 903
Autorzy:: Komajda, Kamila
Przygodzka, Dominika
Tematy:: DBS
bawełna
LC-MS/MS
cotton; Pokaż więcej
Wydawca:: Uniwersytet Jagielloński. Wydawnictwo Uniwersytetu Jagiellońskiego
Powiązania:: https://bibliotekanauki.pl/articles/59346124.pdf Link otwiera się w nowym oknie
Opis:: Aim of the study: The aim of this study was to develop and validate a quantitative analysis procedure for four benzodiazepines (alprazolam, diazepam, flunitrazepam, clonazepam) and one Z-drug (zolpidem), applied to cotton material and Whatman® 903 cards in the form of blood spots. Material and Methods: The extraction was conducted using a mixture of phosphate-carbonate buffer pH=6, acetonitrile, and methanol. The blood spots were analyzed using high-performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry. Results: All calibration curves maintained linearity (R²>0.995) in the concentration ranges of 1-50 ng/ml on cotton material and Whatman ® 903 cards. The Limit of Detection (LOD) and Limit of Quantitation (LOQ) for the analyzed substances were in the ranges of 0.04- 0.40 ng/ml (LOD) and 0.12-1.08 ng/ml (LOQ) isolated from Whatman® 903 cards, and 0.06-1.15 ng/ml (LOD) and 0.17-2.04 ng/ml (LOQ) isolated from cotton. Accuracy for concentrations of 5 ng/ml, 10 ng/ml, and 50 ng/ml was comparable in both groups, ranging from 76-101% for Whatman® 903 cards and 73-117% for cotton. No significant matrix effect was observed on the quantitative results of the analyzed benzodiazepines. Conclusions: In the presented study, a qualitative and quantitative analysis procedure for four xenobiotics from the benzodiazepine group and zolpidem, applied as dried blood spots on cotton material and Whatman® 903 cards, was developed and validated. The extraction method presented focused on isolating xenobiotics from blood spots of known volume. Sample extraction using a simple liquid-liquid extraction (LLE) technique creates opportunities for applying the described method to real samples secured on cotton material or stored on Whatman® 903 cards.
Cel pracy: Celem niniejszej pracy było opracowanie i zwalidowanie procedury analizy ilościowej dla czterech związków z grupy benzodiazepin (alprazolam, diazepam, flunitrazepam, klonazepam) oraz jednego leku z grupy Z-drugs (zolpidem), naniesionych na materiał bawełniany oraz karty Whatman® 903 w postaci plam krwi. Materiały i metody: Ekstrakcję przeprowadzono przy pomocy mieszaniny buforu fosforanowo-węglanowego ph=6, acetonitrylu i metanolu. Plamy krwi analizowano z wykorzystaniem wysokosprawnej chromatografii cieczowej sprzężonej ze spektrometrią mas typu potrójny kwadrupol. Wyniki: Wszystkie krzywe kalibracyjne zachowały liniowość R2>0,995 w zakresach stężeń 1-50 ng/ml na materiale bawełnianym oraz kartach Whatman® 903. LOD (z ang. Limit of detection) oraz LOQ (z ang. Limit of quantitation) dla analizowanych substancji mieściły się w zakresach: 0,04-0,40 ng/ml (LOD) i 0,12-1,08 ng/ml (LOQ) izolowanych z kart Whatman® 903 oraz 0,06-1,15 ng/ml (LOD) i 0,17-2,04 ng/ ml (LOQ) izolowanych z bawełny. Dokładność dla stężeń 5 ng/ml, 10 ng/ml oraz 50 ng/ml była porównywalna w obu grupach i wynosiła 76-101% dla kart Whatman® 903 oraz 73-117% dla bawełny. Nie wykazano znaczącego wpływu matrycy na ilościowy wynik analizowanych benzodiazepin. Wnioski: W przedstawionym badaniu opracowano oraz zwalidowano procedurę analizy jakościowej oraz ilościowej czterech ksenobiotyków z grupy benzodiazepin oraz zolpidemu, naniesionych, jako suche plamy krwi na materiał bawełniany i karty Whatman® 903. Przedstawiona metoda ekstrakcji skupiała się na izolacji ksenobiotyków z plam krwi o znanej objętości. Ekstrakcja próbek przy pomocy prostej techniki LLE (z ang. Liquid–liquid extraction) stwarza możliwości zastosowania opisanej metody do rzeczywistych próbek zabezpieczonych na materiale bawełnianym lub przechowywanych na kartach Whatman® 903.
Dostawca treści:: Biblioteka Nauki

Artykuł

na półce

Skocz do pozycji: 7.

Tytuł:: Znaczenie granicy wykrywalności metody LC/MS przy interpretacji wyników identyfikacji środków odurzających i substancji psychotropowych dla celów sądowych
The importance of the limit of detection of the LC/MS method in the interpretation of the results for the narcotic drugs and psychotropic substances identification for forensic purposes.
Autorzy:: Turek, Agata
Opis:: Kluczowym zadaniem analizy chemicznej w toksykologii sądowej jest znalezienie odpowiedzi na pytanie czy analit znajduje się w próbce. Coraz częściej w identyfikacji środków odurzających i substancji psychotropowych stosowana jest technika LC/MS. Jak dotąd nie zostało wypracowane jednolite stanowisko analityków w kwestii wyznaczania granicy wykrywalności dla tej metody. W niniejszej pracy dokonano przeglądu dostępnych podejść. Przeprowadzono analizę próbek krwi na obecność morfiny w warunkach zbliżonych do rutynowego przebiegu postępowania w analizie chemiczno – toksykologicznej. Zbadano wpływ aparatu i matrycy na wynik analizy. Przedstawiono tok postępowania pozwalający stwierdzić obecność lub nieobecność analitu w próbce możliwy do wprowadzenia w każdym laboratorium toksykologicznym. Zaproponowano metodę wlewu wzorca podczas analizy próbki badanej jako możliwość kontrolowania i korekty granicy wykrywalności.
The principal aim of chemical analysis in forensic toxicology is to answer the question of whether the analyte is present in the sample. Increasingly, the LC/MS method is used to identify narcotic drugs and psychotropic substances. So far, the common standpoint for determination of the limit of detection in the method has not been elaborated. In this paper, the available approaches were reviewed. The blood samples for the presence of morphine were analysed under the conditions similar to the routine toxicological analyses. The instrumental and matrix effects on the results were examined. The procedure for confirmation the analyte presence or absence in the sample that can be adopted by any toxicological laboratory was suggested. The postcolumn infusion was proposed as a method of the verification and the correction of the limit of detection.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 8.

Tytuł:: Development and validation of the method for quantitative analysis of selected angiotensins in biological samples using LC/MS
Opracowanie i walidacja metody analizy ilościowej wybranych angiotesyn w próbkach biologicznych z zastosowaniem techniki LC/MS.
Autorzy:: Czudec, Karolina
Opis:: W niniejszej pracy magisterskiej opracowano i zwalidowano metodę jednoczesnego oznaczania stężenia dwunastu wybranych angiotensyn w sztucznym osoczu z zastosowaniem techniki LC/MS/MS.Wysoką selektywność oraz specyficzność opracowywanej metody bioanalitycznej uzyskano poprzez optymalizację parametrów charakterystycznych dla spektrometru mas oraz warunków analizy chromatograficznej. Rozdzielenie chromatograficzne analitów przeprowadzono w odwróconym układzie faz, z zastosowaniem kolumny analitycznej Acquity UPLC BEH C8 oraz gradientowego trybu elucji analitów. Szczególną uwagę poświęcono opracowaniu najbardziej efektywnej procedury oczyszczania próbek, w której ostatecznie wybrano ekstrakcję do fazy stałej SPE z zastosowaniem kolumn Oasis μElute HLB oraz metanolu jako eluentu.Metodę oznaczania stężeń angiotensyn zwalidowano w zakresie liniowości, dokładności i precyzji metody, odzysku analitów, efektu matrycy oraz stabilności angiotensyn po procesie przygotowania próbek. Uzyskane zakresy liniowości dla krzywych kalibracyjnych są odmienne dla badanych związków, a czułość metody wzrasta w przypadku angiotensyn o krótszych łańcuchach peptydowych. Wyznaczona dokładność wewnątrzseryjna oceniona na trzech poziomach stężeń analitów mieściła się w zakresie 77,80% - 138,33%, precyzja wewnątrzseryjna nie przekraczała 14,68%. Opracowana procedura oczyszczania próbek zapewniła odzysk analitów w zakresie 56,45-86,27%, a zaobserwowany efekt matrycy skutkował wzmocnieniem sygnału dla większości badanych angiotensyn. Stwierdzono również iż, anality są stabilne przez czas co najmniej 9 godzin w warunkach przechowywania próbki przed jej analizą.Opracowana metoda oznaczania stężenia angiotensyn w osoczu ludzkim zawierającym mieszaninę inhibitorów proteaz (PIC) umożliwia wykrycie i oznaczenie stężenia tylko angiotensyny II. Stężenia pozostałych angiotensyn znajdują się poniżej zakresu liniowości metody lub nie są wykrywalne w badanych próbkach. Inkubacja osocza ludzkiego w obecności Ang I oraz Ang II wykazała konwersję tych angiotensyn do peptydów o krótszych łańcuchach aminokwasowych wskazując na zachowaną aktywność enzymów układu RAA w osoczu.
In this thesis, the method for simultaneous quantification of the twelve selected angiotensins in the artificial plasma using the LC/MS/MS technique was developed and validated.High selectivity and specificity of the developed bioanalytical method were obtained by optimizing the parameters characteristic for the mass spectrometer as well as conditions for chromatographic analysis. Chromatographic separation was carried out in the reverse-phase mode using an Acquity UPLC BEH C8 analytical column, and a gradient elution. The research was focused on the development of the most efficient sample purification procedure, in which the extraction to solid phase SPE was chosen with the use of Oasis µElute HLB columns and methanol as the eluent .The method for angiotensin quantification was validated in terms of linearity, accuracy precision, recovery of analytes, matrix effect, and stability of angiotensins after the sample preparation process. The linearity ranges assessed based on the calibration curves were diverse for the studied compounds. The sensitivity of the method increases in the case of angiotensins with shorter peptide chains. The intra-series accuracy determined at three concentration levels of analytes was in the range of 77.80% - 138.33% and the value of intra-series precision did not exceed 14.68%. The developed procedure for sample purification ensured the recovery of 56.45-86.27%. The matrix effect observed for the samples was registered as the amplification of the signal for most of the studied angiotensins. Analytes were stable for at least 9 hours under-sample storage conditions before analysis.The developed method for determining the concentration of angiotensins in human plasma containing protease inhibitor coctail (PIC) allows to detect only angiotensin II. The concentration of the other angiotensins are below the linearity range of the method or are not detectable in tested samples. Incubation of human plasma in the presence of Ang I and Ang II showed the conversion of these angiotensins to peptides with shorter amino acid chains indicating the retained plasma RAA enzyme activity.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 9.

Tytuł:: Investigetion of ergot alkaloids in Ipomoea plant samples using chromatographic techniques, mass spectrometry, and chemometrics tools
Analiza alkaloidów sporyszu w próbkach wilca z wykorzystaniem technik chromatograficznych, spektrometrii mas oraz narzędzi chemometrycznych
Autorzy:: Jani Thaviligadu, Diksha
Opis:: Głównym tematem niniejszej pracy są badania nad roślinami z rodzaju Ipomoea (wilec), znanych pod wspólną nazwą Morning Glory, w tym identyfikacja obecnych w nich alkaloidów sporyszu oraz zbadanie możliwości klasyfikacji nasion Ipomoea pochodzących z różnych źródeł. Analizę nasion przeprowadzono przy wykorzystaniu chromatografii cieczowej sprzężonej ze spektrometrią mas (LC-MS) oraz chromatografii gazowej sprzężonej ze spektrometrią mas (GC-MS). Metoda przygotowania próbek została zoptymalizowana w trakcie wcześniejszych prac, podczas których wybrano ekstrakcję wspomaganą ultradźwiękami jako najbardziej efektywną w procesie ekstrakcji analitów. Zbiór próbek poddanych analizie składał się z wielu różnych dostępnych na rynku nasion wilca, przynależących do różnych gatunków.Analiza LC-MS została wykonana w pierwszej kolejności w celu wykrycia i potwierdzenia obecności alkaloidów sporyszu w próbkach wilca. Wykorzystanie wzorców erginy, ergometryny i lizergolu umożliwiło prawidłową identyfikację wszystkich związków. Następnie przeprowadzono analizę statystyczną zebranych danych. Dane LC-MS poddano analizie chemometrycznej z użyciem narzędzi: metody składowych głównych (ProfileAnalysis, Bruker) oraz analizy podobieństwa (STATISTICA, StatSoft), którą wykorzystano do wykonania analizy skupień. Na pierwszym etapie badań wykonano porównanie pomiędzy próbkami przygotowanymi z pojedynczych nasion i próbkami reprezentatywnymi dla danego opakowania nasion. Następnie porównano wyniki LC-MS dwóch różnych typów nasion, w celu sprawdzenia możliwości ich rozróżnienia. ProfileAnalysis był podstawowym programem wykorzystanym w tych badaniach, natomiast analiza skupień została wykonana w celu potwierdzenia obserwacji.W celu wykonania analizy GC-MS próbki były przede wszystkim poddane derywatyzacji z użyciem kilku różnych procedur. Wykorzystano również sorbenty Z-Sep oraz Z-Sep+, które okazały się niezbędne, aby w procesie przygotowania próbki w zakresie oczyszczenia ekstraktów ze składników matrycy, które mogły utrudniać analizę.Opracowana metoda LC-MS umożliwiła identyfikację wszystkich alkaloidów sporyszu obecnych w ekstraktach, łącznie z lizergolem. Ponadto, różne typy nasion wilca, pochodzące od wielu producentów zostały poprawnie rozróżnione i przyporządkowane przy użyciu narzędzi chemometrycznych. Ta metodyka może znaleźć zastosowanie w badaniach sądowych: próbki nieznanego pochodzenia mogą zostać zidentyfikowane na podstawie danych LC-MS.
This research work deals mainly with the study of the Ipomoea plant, more commonly known as Morning Glory and involves identification of ergot alkaloids and to investigate the possibility to differentiate between seeds from different sources. The analysis was performed on the seeds of the plant with the use of liquid chromatography - mass spectrometry (LC-MS) as well as gas chromatography - mass spectrometry (GC-MS). The sample preparation method was already optimised in a previous work and the ultrasound-assisted extraction method was singled out to be the most effective technique for the extraction of the analytes of interest. The collection of investigated samples included various Morning Glory seeds of different species available on the market.The analysis conducted by LC-MS was done primarily to identify and confirm the presence of all the ergot alkaloids present in the Ipomoea plant. The use of ergine, ergometrine and lysergol standards were beneficial to successfully determine all of those psychoactive compounds. Then, the statistical study of the collected data was performed. Following the analysis, the results obtained were treated by chemometrics tools: principal component analysis (ProfileAnalysis, Bruker) and cluster analysis (STATISTICA software, StatSoft). Firstly, observations were made on how single seeds from one packet behave in comparison to several seeds sampled from the same packet. Afterwards, the LC-MS results from samples of 2 different kinds of seeds were compared to see if they can be distinguished from each other. Profile Analysis made these tasks possible and cluster analysis was used to confirm the outcomes generated by Profile Analysis.Concerning all the analysis done with the GC-MS, ergot alkaloids present in the sample extracts were, first and foremost, derivatised according to several different protocols and Z-Sep and Z-Sep+ were used as sorbents to purify the seeds extracts from the matrix that could interfere with the analysis. The developed LC-MS method enabled the identification of all of the ergot alkaloids together with lysergol. Additionally, the different packets of Ipomoea seeds obtained from various retailers were successfully distinguished one from each other with the use of chemometrics tools. This procedure may be applied to forensics research work so that depending on the behaviour of the samples, the provenance of the relevant substance can be determined.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 10.

Tytuł:: Development of an LC-MS/MS method for the determination of memantine using the dried blood spots technique
Opracowanie metody LC-MS/MS oznaczania memantyny z zastosowaniem techniki suchej plamki krwi
Autorzy:: Czereba, Sylwia
Opis:: Memantyna (MEM) jest lekiem zarejestrowanym w terapii otępienia, zwłaszcza w przebiegu choroby Alzheimera. Dodatkowo wykazuje potencjał w leczeniu schorzeń neurodegeneracyjnych i neuropsychiatrycznych, co zwiększa liczbę badań nad tym lekiem. W ostatnich latach dużą uwagę zwraca się na technikę suchej plamki krwi (DBS), która rozwija się zwłaszcza w zakresie terapeutycznego monitorowania leków, a także w badaniach nad farmakokinetyką i farmakodynamiką leków i nowych związków. Głównymi zaletami DBS jest nieinwazyjny sposób pobrania materiału, niewielka wymagana objętość krwi, a także łatwość przechowywania i transportu. Celem niniejszej pracy było opracowanie, wstępna walidacja i ocena przydatności techniki DBS w oznaczeniach stężenia MEM w krwi szczurzej z wykorzystaniem LC-MS/MS. Wysoka specyficzność metody LC-MS/MS oraz możliwość ilościowego oznaczania analitów w próbkach wieloskładnikowych, przemawia za jej użyciem do oznaczania MEM. Parametry LC i MS zostały zoptymalizowane pozwalając na uzyskanie smukłych i symetrycznych pików dla MEM z czasem retencji powyżej 4 minut. Ustalono także zoptymalizowaną procedurę ekstrakcji leku z kart QIAcard przy użyciu metanolu. Przeprowadzono częściową walidację metody, sprawdzając liniowość, precyzję i dokładność oznaczeń MEM w metanolu i osoczu. Wyniki wstępnej walidacji LC-MS/MS wskazują na jej przydatność w oznaczeniach MEM. Co więcej przeprowadzone badanie wydajności ekstrakcji leku z kart QIAcard w oparciu o stosunek średnich pól powierzchni pod pikiem po ekstrakcji z DBS i z pełnej krwi szczurzej równy 0,97 wskazuje na potencjał techniki DBS w oznaczeniach MEM. Potwierdzenie tej tezy wymaga jednak przeprowadzenia pełnej walidacji metody.
Memantine (MEM) is registered for the treatment of dementia, particularly in Alzheimer’s disease. Additionally, it shows potential in the treatment of neurodegenerative and neuropsychiatric disorders, which increases the number of studies on this drug. Recently, much attention has been paid to the dry blood spot (DBS) technique, which is developing especially in the field of therapeutic drug monitoring, as well as in studies on pharmacokinetics and pharmacodynamics. The main advantages of DBS are the non-invasive method of sampling, small volume of required blood, as well as ease of storage and transport. The purpose of this study was to develop, preliminary validate and evaluate the utility of the DBS technique in determining the concentration of MEM in rat blood using LC-MS/MS. The high specificity of the LC-MS/MS method and the possibility of quantitative determination of analytes in complex samples, argues for its use as suitable for determining MEM. LC and MS parameters were optimized, allowing to obtain sharp and symmetrical peaks for MEM with retention time over 4 min. An optimized extraction procedure of the drug from QIAcards using methanol was established. Partial validation of the method was performed, checking the linearity, precision, and accuracy. The results of the validation indicate its utility in MEM determination. Moreover, the extraction efficiency study of the drug from QIAcard, based on the ratio of the average peak areas equal to 0.97, indicates the potential of the DBS technique in MEM determination. However, confirmation of this thesis would require a full validation of the method.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Informacja

Wyszukujesz frazę "LC-MS" wg kryterium: Temat