Temat: stem - Prolib Integro

Skocz do pozycji: 1.

Tytuł:: Różnicowanie in vitro neuralnych komórek macierzystych z ludzkiej krwi pępowinowej : wpływ poziomu tlenu, związków niskocząsteczkowych i geometrii przestrzennej
Autorzy:: Podobińska, Martyna.
Współwytwórcy:: Bużańska, Leonora
Sarnowska, Anna
Wydawca:: Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im.M. Mossakowskiego PAN
Powiązania:: Prace doktorskie
Opis:: W zwiążku z szybkim rozwojem medycyny regeneracyjnej istnieje potrzeba zopytmalizowania zarówno metod otrzymywania, jak i prowadzenia hodowli komórek macierzystych do celów klinicznych. Takie komórki powinny zachowywać, pomimo hodowli in vitro, wysoki potencjał proliferacyjny, progenitorowy charakter,zdolność do ukirunkowanego różnicowania oraz stabilność genetyczną. Wymienione cechy charakteryzują komórki progenitorowe zasiedlające organizmi nisze komórkowe. Odtworzenie w hodowli in vitro podobnych warunków daje nadzieję na stworzenie wystandaryzowanych procedur umożliwiających otrzymanie kompetentnych terapeutycznie komórek.W naszej opinii do najważniejszych czynników warunkujących zachowanie progenitorowego charakteru komórek należą : stężenie tlenu panujące w docelowym narządzie, skład macierzy zewnątrzkoórkowej oraz struktura przestrzenna. Celem przedstawionych w rozprawie badań była ocena wpływu ww. czynników na różnicowanie in vitro neuralnych komórek macierzystych otrzymanych z krwi pępowinowej (HUCB-NSC). W toku prowadzonych badań przeprowadzono analizę zarówno fenotypową jak i molekularną komórek poddanych różnym czynnikom środowiskowym takim jak: 1. zmienne stężęnie tlenu, 2. obecność w środowisku czynników różnicujących oraz zwiążków niskocząsteczkowych wpływajacych na status epigenetyczny i szlkaki sgnałowe związane z proliferacją i różnicowaniem komórki 3. powierzhnie hodowlane 2D vs 3D o różnym składzie biochemicznym i geometrii.
Bibliogr. na str. 136-157
157 s.: il., wykr., fotogr. ; 30 cm
Dostawca treści:: RCIN - Repozytorium Cyfrowe Instytutów Naukowych

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 2.

Tytuł:: Aktywność biologiczna ludzkich mezenchymalnych komórk macierzystych z nad-ekspresją receptora VLA-4 : badania funkcjonalne in vitro i in vivo
Autorzy:: Andrzejewska, Anna
Współwytwórcy:: Łukomska, Barbara (Promotor)
Wydawca:: Instytut Medycyny Dośwaidczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN
Powiązania:: Prace doktorskie
Opis:: Regenerative therapy with the use of stem cells in order to restore damaged tissues and organs has been the subject of interest of the medical and scientific community for several years. Recently, mesenchymal stem cells (MSCs) have been very popular among scientists and clinicians. Currently, they are used in experimental and clinical trials of the treatment of central nervous system (CNS) diseases, such as stroke, Alzheimer's, Huntington's, Parkinson's and others, for which there are no effective alternative treatments. In the literature, we can find articles showing that the transplanted MSCs are actively mobilized to damaged tissues, but the mechanism responsible for this process has not been known so far. Moreover, the colonization of damaged tissue areas by systemically administered cells is much less efficient in the case of MSCs than in the case of leukocytes, which may be caused by the lack of expression of receptors and adhesive proteins essential for this process. Increase of the expression of proteins responsible for adhesion and migration may have a positive impact on the transfer of transplanted cells from the vascular bed and their mobilization to the lesion area. The aim of my study was to verify the hypothesis whether increase of VLA-4 integrin expression in MSCs would allow for the enhancement of their adhesive and transmigration properties after systemic transplantation in rat model of brain damage. MSCs with VLA-4 overexpression were obtained by genetic modification with ITGA4 mRNA. The results of the research revealed that transfection with above mentioned construct causes the cells to express the α4 subunit of the VLA-4 integrin, which is not present in native MSCs. Next, the assessment of the movement pattern and adhesion ability of the modified MSCs was performed by applying a microfluidic technique adapted to our purpose, which was used as a model of cell flow through capillary blood vessels. This study showed that during cell flow through the microfluid device both native and modified ITGA4 MSCs mRNA undergo rolling and crawling processes analogous to the steps observed during leukocyte diapedesis. It also revealed that MSCs modified with ITGA4 mRNA were characterized by increased adhesive activity, resulting in an elevated number of cells that stopped while flowing through the chamber. The increase in the adherence rate of cells transfected with ITGA4 mRNA was confirmed in studies with the use of two-chamber transwell culture plates. Subsequently, MSCs characterized by increased expression of the α4 subunit of VLA-4 integrin or native cells were transplanted intra-arterially into the internal carotid artery to rats with striatal damage performed 48 hours earlier. The results of the MRI analysis showed that the MSCs were flowing into the damaged right hemisphere. Moreover, more VLA-4 overexpressing MSCs as compared to the non-genetically modified native cells were seen in the lesion area. Immunohistochemical tests confirmed the results obtained in MRI. They also showed that the transplanted MSCs remained within the brain's blood vessels. 72 hours after transplantation, some cells were visible in the perivascular space. These studies showed that the transfection of human bone marrow mesenchymal stem cells with ITGA4 mRNA induces the expression of the α4 subunit of the VLA-4 integrin, increasing the adhesion ability of the modified cells both in vitro and in vivo. After cell transplantation, the increased expression of the VLA-4 receptor on the surface of MSCs results in the effective accumulation of the transplanted cells in the brain's blood vessels near the lesion, so induction of overexpression of α4 integrin may be used in the future as a potential strategy to increase the colonization of damaged brain areas by systemically administered cells stem.
Bibliogr. na str. 121-144
144 s.: il., wykr., tabl., fotogr.; 30 cm
Terapia regeneracyjna z wykorzystaniem komórek macierzystych w celu odtworzenia uszkodzonych tkanek i narządów jest przedmiotem zainteresowania środowisk medycznych i gremiów naukowych od kilkunastu lat. Ostatnio dużym zainteresowaniem wśród naukowców i klinicystów cieszą się mezenchymalne komórki macierzyste (MSCs). Aktualnie wykorzystywane są one w próbach eksperymentalnych i klinicznych terapii chorób ośrodkowego układu nerwowego (OUN), takich jak udar mózgu, choroba Alzheimera, Huntingtona, Parkinsona oraz inne, dla których brak jest skutecznych alternatywnych metod leczenia. W dostępnych źródłach literaturowych możemy znaleźć prace pokazujące, że przeszczepiane MSCs podlegają mobilizacji do uszkodzonych tkanek w sposób aktywny, jednak mechanizm odpowiedzialny za ten proces nie został jak dotąd poznany. Ponadto, zasiedlanie rejonów uszkodzenia w tkance przez systemowo podane komórki jest dużo mniej wydajne w przypadku MSCs niż leukocytów, czego przyczyną może być brak ekspresji istotnych dla tego procesu receptorów oraz białek adhezyjnych. Zwiększenie ekspresji białek odpowiedzialnych za adhezję i migrację może mieć pozytywny wpływ na przechodzenie przeszczepianych komórek z łożyska naczyniowego i ich mobilizację do rejonu uszkodzenia. Celem moich badań było zweryfikowanie hipotezy czy zwiększenie ekspresji integryny VLA-4 w MSCs pozwoli na wzmocnienie ich właściwości adhezyjnych i transmigracyjnych po transplantacji systemowej u szczurów w modelu uszkodzenia mózgu. Komórki MSCs z nad-ekspresją VLA-4 zostały otrzymane metodą modyfikacji genetycznej z udziałem mRNA ITGA4. Wyniki badań ujawniły, że transfekcja wymienionym konstruktem powoduje, iż w komórkach pojawia ekspresja podjednostki α4 integryny VLA-4, która nie występuje w natywnych MSCs. Następnie dokonano oceny ruchu i przylegania zmodyfikowanych komórek MSCs poprzez zastosowanie zaadaptowanej do naszych celów techniki mikroprzepływów, która została wykorzystana jako model przepływu komórek przez kapilarne naczynia krwionośne. Badanie to wykazało, że podczas przepływu komórek przez komorę zarówno natywne jak i modyfikowane mRNA ITGA4 MSCs podlegają procesom toczenia i pełzania, analogicznym do etapów obserwowanych podczas diapedezy leukocytów. Okazało się także, że MSCs modyfikowane mRNA ITGA4 charakteryzują się wzmożoną aktywnością adhezyjną, co skutkuje zwiększeniem liczby komórek, które zatrzymują się podczas przepływu przez komorę mikroprzepływową. Wzrost zdolności do przylegania komórek transfekowanych mRNA ITGA4 został potwierdzony w badaniach z wykorzystaniem dwukomorowych szalek hodowlanych typu transwell. Następnie MSCs charakteryzujące się zwiększoną ekspresją podjednostki α4 integryny VLA-4 lub komórki natywne przeszczepiano dotętniczo, do tętnicy szyjnej wewnętrznej, szczurom po 48 godzinach od wykonania uszkodzenia prążkowia. Wyniki analizy MRI wykazały, że MSCs napływały do prawej uszkodzonej półkuli. Ponadto więcej MSCs z nad-ekspresją VLA-4 w stosunku do komórek natywnych niemodyfikowanych genetycznie, było widocznych w okolicy lezji. Badania immunohistochemiczne potwierdziły wyniki uzyskane w MRI. Wykazały również, że przeszczepione MSCs pozostawały w obrębie naczyń krwionośnych mózgu. Po 72 godzinach od transplantacji część komórek była widoczna w przestrzeni periwaskularnej. Badania te pokazały, że transfekcja ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego mRNA ITGA4 indukuje ekspresję podjednostki α4 integryny VLA-4, zwiększając zdolność adhezji zmodyfikowanych komórek zarówno w warunkach in vitro jak i in vivo. Po transplantacji komórek zwiększenie ekspresji receptora VLA-4 na powierzchni MSCs skutkuje efektywnym gromadzeniem się przeszczepianych komórek w naczyniach krwionośnych mózgu przebiegających w pobliżu lezji, tak więc indukcja nadekspresji integryny α4 może być w przyszłości wykorzysta jako potencjalna strategia zwiększająca zasiedlanie obszarów uszkodzenia mózgu przez systemowo podane komórki macierzyste.
Dostawca treści:: RCIN - Repozytorium Cyfrowe Instytutów Naukowych

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 3.

Tytuł:: Ocena potencjału neurogennego ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych pochądzących z róznych żródeł : krwi i sznura pępowinowego oraz szpiku kostnego
Autorzy:: Drela, Katarzyna
Współwytwórcy:: Domańska-Janik, Krystyna
Wydawca:: Medical Research Center Polish Academy of Sciences
Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN
Opis:: Bibliogr. zawiera 252 pozycje
139 s. : il., wykr., fotogr., tabl. ; 30 cm
Dostawca treści:: RCIN - Repozytorium Cyfrowe Instytutów Naukowych

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 4.

Tytuł:: Indukcja pluripotencjalności i róznicowania neuralnych komórek progenitorowych z ludzkiej krwi pępowinowej: rola czynników epigenetycznych
Indukcja pluripotencjalności i różnicowania neuralnych komórek progenitorowych z ludzkiej krwi pępowinowej : rola czynników epigenetycznych i obniżenia stężenia tlenu
Autorzy:: Szablowska-Gadamska, Ilona
Szabłowska-Gadomska, Ilona
Współwytwórcy:: Bużanska, Leonora
Bużańska, Leonora
Wydawca:: Mossakowski Medical Research Center PAS
Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN
Powiązania:: Prace doktorskie.
Opis:: 167 s. : il., wykr., fotogr.; 30 cm
Bibliogr. zawiera 204 pozycje
Bibliography: 204 poz.
Dostawca treści:: RCIN - Repozytorium Cyfrowe Instytutów Naukowych

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 5.

Tytuł:: Rozwojowo-zależna indukcja biogenezy mitochondriów podczas różnicowania neuralnego ludzkich indukowanych pluripotencajalnych komórek macierzystych (hiPSC)
Autorzy:: Augustyniak, Justyna
Współwytwórcy:: Bużańska, Leonora
Wydawca:: Instytut Medycyny Doswiadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN
Opis:: Human induced pluripotent stem cells (hiPSC) generated from somatic cells through genetic reprogramming influenced greatly development of basic research in regenerative medicine as well as in vitro toxicology and pharmacology field. The progress in the “safemethods” of hiPSC generation (without the integration of the transgene into the host genome, eg., mRNA, recombinant proteins, miRNA’s, episomal vectors) gave an opportunity to use this cells in personalized cell therapy. In addition, the hiPSC serve as ethically non-controversial in vitro model of early human development which is an alternative to the model of human embryonic stem cells (hESC). The cycle of publications chosen for the theses investigates the influence of stimulation of mitochondrial biogenesis on the early stages of hiPSC neural differentiation. In this study, neural differentiation of hiPSC resulted in obtaining three distinct cells populations: neural stem cells (NSC), early neural progenitors (eNP), and neural progenitors (NP) however, the population of eNP cells has been characterized for the first time. Analysis of the gene and protein expression have shown that NSC, eNP and NP cell populations were significantly different in the level of unique markers for early neural development. The obtained cell populations were investigated for their sensitivity to compounds stimulating the mitochondrial biogenesis: Pyrroloquinoline quinone (PQQ) or idebenone (IDB), which were added independently. The results revealed significant changes in the cells viability, free radical level (ROS) and mitochondrial membrane potential (ΔΨm) upon the treatment with PQQ and IDB in all tested populations. The expression of genes related with mitochondrial biogenesis regulation: NRF1, PPARGC1A andTFAM were also significantly different. However exclusively at the eNP stage, after incubation with PQQ and IDB, all markers indicating stimulation of mitochondrial biogenesis were significantly elevated.This included upregulation of NRF1, PPARGC1A, TFAM gene expression, increased number of copies of mitochondrial DNA (mtDNA) and significant elevation of expression of proteinsimportant for mitochondrial function: COX-1 and SDHA. Gene expression analysis of neural differentiation upon PQQ treatment revealed in NSC and eNP stages of developmentsimultaneous increase in expression of PPARGC1A (main regulator of mitochondrial biogenesis) and astrocyte marker GFAPaccompanied with repression of the neuronal marker MAP2. IDB in all stages of development yielded a similar effect with the exception of eNP, where stimulation of theexpression of both GFAP and MAP2was observed, although the increase in GFAP expression was higher. The above data demonstrate the existence of developmental “window of sensitivity" for investigated factors (PQQ, IDB) inducing mitochondrial biogenesis at eNP stage of development and the possibility of influencing of the neural differentiation pathways via PQQ and IDB in favour of astrocytic fate.
Biblliografia zawiera 40 pozycji.
95 s.: il., wykr.tabl., fotogr. ; 30 cm.
Odkrycie, że komórki somatyczne można reprogramować do indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC, ang. induced Pluripotent Stem Cells) pozwoliło na znaczny rozwójbadań w dziedzinie medyczny regeneracyjnej, jak również badań toksykologicznych oraz farmakologicznych in vitro. Postęp w otrzymywaniu ludzkich iPSC (hiPSC,ang. human iPSC) tzw. „bezpiecznymi metodami” tj. bez integracji transgenu do genomu gospodarza (np. stosując mRNA, białka rekombinowane, miRNA, wektory episomalne) przyczynił się do wykorzystania tych komórek w spersonalizowanej terapii komórkowej. Dodatkowo hiPSC stanowią „niekontrowersyjną etycznie”alternatywę dla ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hESC,ang. human Embryonic Stem Cells) w modelowaniu in vitrowczesnych etapów rozwojuczłowiekadzięki zdolności doróżnicowania we wszystkie tkanki organizmu. W cyklu publikacji stanowiących rozprawędoktorskąprzedstawiono wyniki oceny wpływu stymulacji biogenezy mitochondriów na wczesne etapy różnicowania neuralnego komórek hiPSC. W tym celu z hiPSC otrzymano trzy populacje komórkowe: neuralne komórki macierzyste (NSC, ang. Neural Stem Cells), wczesne progenitory neuralne (eNP, ang. early Neural Progenitors) oraz progenitory neuralne (NP, ang. Neural Progenitors), przy czym komórki eNP scharakteryzowano po raz pierwszy. Badane populacje komórkowe różniłysię istotnie pod względem ekspresjimarkerów typowych dla rozwoju neuralnego na poziomie mRNA i białek. Komórki NSC, eNP oraz NP zostały poddane ekspozycji na substancje indukujące biogenezę mitochondriów: pirolochinolinochinon (PQQ) lub idebenon (IDB). Pod wpływem tych związków wykazano istotne zmiany w parametrach ważnych dlaprocesów życiowychkomórki: żywotności, poziomie wolnych rodników (RFT), potencjale błony mitochondrialnej (ΔΨm) oraz ekspresji genów związanych z regulacją biogenezy mitochondriów: NRF1, PPARGC1A, TFAM. Wzrostowi ekspresji tych genów towarzyszył wzrostpozostałych badanych markerów biogenezy mitochondriów: liczby kopii mitochondrialnego DNA (mtDNA) oraz ekspresji białek SDHA i COX-1, wyłącznie w stadium eNP. W komórkach NSC i eNP, po inkubacji z PQQ zanotowano równoczesny wzrost ekspresji genu PPARGC1Aoraz markera astrocytów GFAP, przy jednoczesnym spadku ekspresji markera neuronalnego MAP2. IDB działał podobnie we wszystkich stadiach, z wyjątkiem eNP, gdzie stymulował ekspresję zarówno GFAP jak i MAP2. Powyższe wyniki świadczą o istnieniu w stadium eNP „przedziału wrażliwości rozwojowej” na PQQ oraz IDB, a także o pozytywnym wpływie stymulacji biogenezy mitochondriów na różnicowanie komórek hiPSC w kierunku astrocytarnym.
Dostawca treści:: RCIN - Repozytorium Cyfrowe Instytutów Naukowych

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 6.

Tytuł:: Transplantacja ludzkich progenitorów neuralnych krwi pępowinowej do mózgu szczura po uszkodzeniu ouabainą : wzajemne oddziaływanie komórek dawcy i biorcy
Autorzy:: Jabłońska, Anna
Współwytwórcy:: Łukomska, Barbara
Wydawca:: Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M.Mossakowskiego PAN
Powiązania:: PhD. Dissertations
Praca doktorska
Opis:: 136 s. : il., wykr., fotogr.; 30 cm
Bibliogr. na str. 103-130
Dostawca treści:: RCIN - Repozytorium Cyfrowe Instytutów Naukowych

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 7.

Tytuł:: Analiza właściwości immunomodulacyjnych ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego i pochodzących z nich zewnątrzkomórkowych pęcherzyków przeszczepianych w modelu cytoksycznego uszkodzenia mózgu u szczura
Autorzy:: Dąbrowska, Sylwia
Współwytwórcy:: Łukomska, Barbara
Wydawca:: Instytut Medycyny Doswiadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN
Powiązania:: Prace doktorskie
Opis:: 121 s.: il., wykr., fotogr. ; 30 cm
Celem badań była ocena właściwości immunomodulacyjnych ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego (hBM-MSCs) oraz wyizolowanych z nich zewnątrzkomórkowych pęcherzyków (EVs) przeszczepianych u dorosłych szczurów w modelu cytotoksycznego uszkodzenia mózgu ouabainą. Ocena potencjalnych efektów działania EVs w badaniach przedklinicznych w porównaniu z przeszczepem MSCs jest konieczna przed zastosowaniem ich w próbach klinicznych. Do badań wykorzystano model cytotoksycznego uszkodzenia mózgu szczurów stada Wistar z zastosowaniem inhibitora pompy sodowo-potasowej (ouabainy). Po 48 godzinach od podania 1μl/50nmol ouabainy do prążkowia szczura, do prawej tętnicy szyjnej wewnętrznej przeszczepiano 5x105 hBM-MSCs wyznakowanych nanocząstkami żelaza skoniugowanymi z rodaminą (Molday ION) lub 1x109 EVs wybarwionych lipofilnym markerem PKH26. Podane dotętniczo hBM-MSCs lub EVs były oceniane w mózgu biorców w czasie rzeczywistym w badaniach MRI tuż po ich podaniu, a także po 1, 3, 7 i 14 dniach od transplantacji. W tych samych sekwencjach czasowych od zwierząt eksperymentalnych były pobierane mózgi, gdzie w skrawkach mrożonych przeprowadzano ocenę komórek dawcy i komórek immunologicznie czynnych biorcy stosując metody immunohisto-chemiczne oraz poziomu cytokin i chemokin za pomocą zestawów BioPlexPro techniką Luminex. Otrzymane wyniki wykazały, że ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste szpiku kostnego lub pochodzące z nich zewnątrzkomórkowe pęcherzyki podawane do prawej tętnicy szyjnej szczura gromadziły się w mózgu biorców przeszczepu w okolicy wywołanego wcześniej uszkodzenia. Po transplantacji hBM-MSCs lub EVs obserwowano zmniejszenie aktywacji komórek mikrogleju oraz liczby leukocytów, w tym limfocytów T CD8+ w mózgu zwierząt, których wzrost był spowodowany cytotoksycznym uszkodzeniem prążkowia. Analiza cytokin oraz chemokin w mózgu szczurów wykazała, że przeszczep hBM-MSCs lub EVs powodował obniżenie poziomu cytokin: IL-1α, IL-1β, IL-6, i TGF-β2 oraz chemokin: CXCL1, MIP-1 α, MIP-3 α i MCP-1, których zwiększenie obserwowano po uszkodzeniu mózgu.
Bibliogr. na str. 98-121
The aim of the study was to compare the immunomodulatory properties of human bone marrow mesenchymal stem cells (hBM-MSCs) and extracellular vesicles derived from these cells (EVs) transplanted in focal brain ischemic rats. Verification of therapeutic effects of MSCs or proposed EVs in experimental model of brain ischemia is necessary to begin clinical trials in patients. The studies were performed in adult male Wistar rats with focal brain injury of 1μl/50nmol ouabain injected into the right hemisphere. This cytotoxic brain injury model using ouabain (the inhibitor sodium-potassium pump) has been developed in our laboratory. Two days after ischemic insult 5x105 hBM-MSCs labeled with superparamagnetic iron oxide nanoparticles conjugated with rhodamine (Molday ION) or 1x109 EVs stained with PKH26 were transplanted into the right internal carotid artery of Wistar rats and the inflow of transplanted cells in the rat brain was monitored using MRI. At day 1, 3, 7 and 14 post-transplantation rats were decapitated, the brains were removed and the presence of the donor cells was confirmed by immunohistochemical studies. The cellular immune response in the brain was evaluated by immunohistochemical stainings and the production of humoral factors was measured by Bio-Plex ProTM Cytokine, Chemokine and Growth Factor Assay (BioRad). Our results showed that hBM-MSCs or EVs infused into the rat internal carotic artery migrated into the brain of graft recipients being visible in the right injured hemisphere using MRI or confocal microscope after immunohistochemical analysis up to 7 days after transplantation. The results revealed the decrease of activated microglia and leukocytes, including CD8+ T cells, evoked by ischemia in the brain tissue, after hBM-MSCs or EVs transplantation. The infusion of hBM-MSCs or EVs leaded to the reduction of cytokines: IL-1alfa, IL-1beta, IL-6, TGF-β2 and chemokines: CXCL1, MIP-1α, MIP-3α, MCP-1 in comparison to untreated rats with ischemic brain injury
Dostawca treści:: RCIN - Repozytorium Cyfrowe Instytutów Naukowych

Inne

na półce

Informacja

Wyszukujesz frazę "stem" wg kryterium: Temat