- Tytuł:
-
Search for correlation between hepatic clearances of selected drugs estimated in in vitro, ex vivo and in vivo conditions
Poszukiwanie korelacji pomiędzy klirensem wątrobowym wybranych leków wyznaczonym w warunkach in vitro, ex vivo oraz in vivo - Autorzy:
- Fedak, Filip
- Opis:
-
Wstęp: Model izolowanych hepatocytów jest skutecznym narzędziem do wyznaczania w warunkach in vitro wartości klirensu (CL) wątrobowego znanych leków, bądź też nowo odkrytych związków wymagających wstępnych badań typu ADME. Planując różne schematy pobierania próbek i stosując odmienną analizą matematyczną można wyznaczyć zarówno klirens związany z metabolizmem, jak i z transportem badanego związku do hepatocytów.Cel: Celem niniejszej pracy było wyznaczenie klirensu wewnętrznego wybranych leków wykorzystując model izolowanych hepatocytów oraz różne metody pobierania próbek. Wartości CL wyliczone kilkoma różnymi metodami matematycznymi porównano ze sobą, jak również skorelowano z wynikami eksperymentów prowadzonych w warunkach in situ (izolowana perfundowana wątroba) i in vivo.Materiały i metodyka: Izolowane hepatocyty pozyskano od myszy CD-1 metodą dwustopniowej perfuzji z użyciem kolagenazy. Eksperymenty przeprowadzono z zastosowaniem metod konwencjonalnej i „media-loss” dla walsartanu, werapamilu i karbamazepiny oraz dodatkowo metodą „oil spin” dla walsartanu. Analizę ilościową prowadzono z wykorzystaniem systemu LC-MS/MS. Wyniki: Obliczony klirens „uptake” walsartanu był prawie 5 razy wyższy niż klirens metaboliczny co jest związane z aktywnym transportem tego leku do hepatocytów. Dla pozostałych leków obliczone wartości klirensów metabolicznego i „uptake” były zbliżone do siebie. Uzyskano dobrą korelację między wynikami eksperymentów in vitro i in situ dla wszystkich badanych leków. W przypadku walsartanu wyniki porównano z klirensem całkowitym wyznaczonym w warunkach in vivo. Klirens ekstrapolowany (wątrobowy) wynosił 34,5 mL/min/kg m.c. myszy, a wyznaczony w warunkach in vivo klirens całkowity był równy 43,41 mL/min/kg m.c. myszy.Wnioski: Izolowane hepatocyty są dobrym modelem do badań mechanizmów eliminacji wątrobowej zarówno znanych leków jak i nowych substancji o udowodnionej aktywności farmakologicznej.
Introduction: Isolated mouse hepatocytes are a valuable tool used to determine hepatic clearance (CL) of drugs or new compounds requiring ADME studies. Various schemes of collecting samples and different calculating methods allow for the determination of clearances dependent on metabolism and/or transport to hepatocytes.Aim: The aim of this project was to determine values of clearance for designated substances by the aid of primary mouse hepatocytes, using various sampling and calculating methods. Additionally, obtained clearance values have been compared with those derived from in situ (isolated perfused mouse liver) and in vivo experiments.Materials and methods: Hepatocytes were isolated from CD-1 mice, using two step collagenase perfusion method. For each of investigated substances, both conventional and “media-loss” assays have been conducted. Additionally, valsartan has been used in the experiment involving the “oil spin” method. Quantification was performed using validated LC-MS/MS methods.Results: For valsartan, the calculated “uptake” clearance was approximately 5 times higher than the metabolic clearance, what results from an active transport of this drug into hepatocytes. For the rest of studied drugs, the values of “uptake” and metabolic clearances were comparable. A close correlation has been obtained between clearances derived from in vitro and in situ experiments for all substances. The extrapolated valsartan hepatic clearance also correlated with the total clearance determinated in in vivo conditions (34.5 vs 43.41 mL/min/kg mouse body weight).Conclusion: Isolated hepatocytes are a good model to examine mechanisms of hepatic elimination for both known drugs and compounds being under development. - Dostawca treści:
- Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Inne