Autor: Kaczmarczyk, Magdalena

Skocz do pozycji: 1.

Tytuł:: Czy autofagia w komórce Leydiga jest procesem regulowanym estrogenami?
Is autophagy regulated by estrogens in Leydig cell?
Autorzy:: Kaczmarczyk, Magdalena
Opis:: Estrogens play an important role in the regulation of the male reproductive system and besides androgens they are necessary for its proper functioning. Recently, it is suggested that estrogens are also involved in the metabolism of lipids in a process called lipophagy. The aim of this study was to examine whether estrogens regulate the process of autophagy in a Leydig cell. Studies were conducted at the mRNA level using the Real-time PCR technique. As the research material mature mice C57BL/6 (n=6) were used. Testes were isolated and were incubated with the antagonist of G-coupled membrane estrogen receptor (G-15) in organotypic culture system. Two genes – G-coupled membrane estrogen receptor (GPER) and microtubule-associated protein light chain (LC3B) were analyzed. In G-15-treated testes, a decrease in GPER expression was observed, with concomitant decrease in LC3B gene expression. This data indicates that in Leydig cell lipophagy is present and controlled by estrogen signaling involving GPER. This regulation seems to be essential for Leydig cells to perform steroidogenic function. Our research is important to understand estrogen signaling in regulation of Leydig cell function and may also be helpful in searching for molecular targets that can be useful in diagnostics and therapy of infertility based on hormonal background.
Estrogeny odgrywają ważną rolę w regulacji męskiego układu rozrodczego i są one poza androgenami, niezbędne do jego prawidłowego funkcjonowania. Od niedawna sugeruje się, że estrogeny są także zaangażowane w metabolizm lipidów w procesie nazywanym lipofagią. Celem niniejszej pracy było zbadanie czy estrogeny regulują proces autofagii w komórce Leydiga. Badania prowadzono na poziomie mRNA przy użyciu techniki Real-time PCR. Materiał badawczy stanowiły dorosłe samce myszy C57BL/6 (n=6), z których wyizolowano tkanki gonad. Fragmenty gonad inkubowano z antagonistą receptora estrogenowego sprzężonego z białkami G (G-15) w warunkach hodowli organotypowej. Analizie poddano dwa geny – receptor estrogenowy sprzężony z białkami G (GPER) oraz białko związane z mikrotubulami (LC3B). W jądrach traktowanych G-15 obserwowano obniżenie ekspresji genu GPER, z równoczesnym obniżeniem ekspresji genu LC3B. Powyższe dane świadczą więc o tym, że w komórce Leydiga myszy zachodzi proces lipofagii, który kontrolowany jest sygnalizacją estrogenową z udziałem GPER. Proces ten jest kluczowy dla pełnienia funkcji steroidogennych przez komórki Leydiga. Takie badania są potrzebne do zrozumienia działania estrogenów w regulacji funkcjonowania komórki Leydiga i mogą być także pomocne w poszukiwaniu przyszłych celów diagnostyki i terapii niepłodności o podłożu hormonalnym.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 2.

Tytuł:: Changes in mGluR2/3 metabotropic glutamate receptor densities in brain structures of rats following cocaine self-administration
Zmiany w obrębie receptorów glutaminergicznych mGluR2/3 w strukturach mózgowych szczura w modelu samopodawania kokainy
Autorzy:: Kaczmarczyk, Magdalena
Opis:: Uzależnienie od kokainy i innych nielegalnych substancji narkotycznych i psychostymulujących jest poważnym problemem medycznym, ekonomicznym i społecznym. Proces uzależnienia przebiega stopniowo. Okazjonalne przyjmowanie substancji o potencjale uzależniającym po pewnym czasie może przekształcić się w uzależnienie charakteryzujące się kompulsywnym i niekontrolowanym przyjmowaniem substancji oraz nawrotami występującymi nawet po długich okresach abstynencji. Obecnie coraz większą rolę w rozwoju uzależnienia przypisuje się układowi glutaminergicznemu, a zwłaszcza receptorom metabotropowym grupy II. W części teoretycznej niniejszej pracy przedstawiono podstawy molekularne i fizjologiczne rozwoju uzależnienia ze szczególnym uwzględnieniem roli układu glutaminergicznego w tym procesie. Celem części doświadczalnej było zbadanie zmian gęstości receptorów metabotropowych grupy II w dożylnym modelu samopodawania kokainy w strukturach mózgu szczura w dużym stopniu zaangażowanych w proces rozwoju uzależnienia. Doświadczenie przeprowadzono w fazach podtrzymania, wygaszenia i nawrotu nałogu. Otrzymane wyniki potwierdziły kluczową rolę układu glutaminergicznego, w tym receptorów mGluR2/3, w powstawaniu i rozwoju uzależnienia. W grupie zwierząt aktywnie pobierających kokainę uzyskano statystycznie znamienny wzrost gęstości receptorów mGluR2/3, w korze przedczołowej, względem grupy otrzymującej sól fizjologiczną, w fazach podtrzymania nałogu i odstawienia, co może wskazywać na wytworzenie zmian neuroadaptacyjnych względem narastających stężeń glutaminianu i osłabionych procesów LTD. Ponadto dowiedziono udziału motywacji w uzależnieniu oraz wykazano, że zmiany charakterystyczne dla uzależnienia powstają dopiero po wielokrotnej ekspozycji na kokainę. Być może dokładne poznanie mechanizmów leżących u podłoża uzależnienia i poszerzenie wiedzy z tego zakresu, pozwoli w przyszłości na opracowanie skutecznej i bezpiecznej terapii pozwalającej na pełne wyleczenie osób dotkniętych tym problemem.
Addiction to cocaine and other illicit drugs or psychostimulants is a serious medical, economical and social problem. The transition to addiction is gradual process. Occasional drug intake might lead to addiction, which is characterized by compulsive and uncontrolled drug taking and the relapses that can occur even after long period of abstinence. Currently more and more important role in the development of addiction is attributed to the glutamatergic system, especially metabotropic group II receptors. In the theoretical part of this paper, molecular and physiological basis of the cocaine dependence, with particular focus on the role of the glutamatergic system, has been described. The aim of experimental part of this paper was an investigation of changes in density of group II metabotropic receptors in cocaine self-administration model, in rat's brain structures involved in addiction development process. The experiment was performed in three phases of addiction: maintenance, extinction and relapse. The obtained resulsts indicate that glutamatergic signaling, particularly receptors mGluR2/3, plays an important role in cocaine seeking and relapse behaviours. There were a significant elevation in density of mGluR2/3 receptors in active cocaine group compared to yoked saline group in the prefrontal cortex, observed in extinction and relapse phases. This result may suggest a compensatory increase in response to sustained elevations in glutamate concentrations and attenuated LTD processess. Moreover, it has been proved that motivation plays important role in transition to addiction and that changes characteristic for addiction occurs following chronic self-administration. Understanding of the cellular and molecular underpinnings of addiction may lead to discover a novel, save and effective pharmacological therapies in the future.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 3.

Tytuł:: Wygenerowanie molekularnych narzędzi do badania przełączenia między ścieżką tiolacji a urmylacji w szlaku modyfikacji tRNA przez Urm1-Ncs6
Generation of molecular tools for the study of molecular switch between thiolation and urmylation in the Urm1-Ncs6 tRNA modification pathway
Autorzy:: Kaczmarczyk, Magdalena
Opis:: Urm1 jest białkiem zaangażowanym w dwie ścieżki – tiolację tRNA i urmylację. Molekularne przyczyny, które powodują wejście Urm1 w jedną lub drugą ścieżkę są dalej nieznane. Posiadanie narzędzi do badania i zrozumienia molekularnego przełącznia między ścieżkami tiolacji i urmylacji pomogłoby w dokładniejszym zrozumieniu mechanizmu tych reakcji. W ścieżce tiolacji Urm1 oddziałuje z Uba4, które może tioestryfikowaći tiokarboksylować Urm1. Odpowiednio zmodyfikowane Urm1 posiadające koniec -COSH transportuje otrzymaną siarkę na kompleks Ncs2/6, który w efekcie końcowym tioluje tRNA. Gdy Urm1 bierze udział w procesie urmylacji również musi być w formie tiokarboksylowanej. Podczas urmylacji Urm1 przez C-terminalną glicynę wiąże się do reszt lizyny specyficznych celów. Zrozumienie roli i znaczenia specyficznych reszt aminokwasowych wspomnianych białek pomogłoby w dogłębnmym zrozumieniu procesów, w których odgrywają kluczową rolę. Co za tym idzie lepszym zrozumieniu wpływu defektów modyfikacji tRNA na związane z nimi choroby. Również wyjaśnienie przyczyn defektów modyfikacji tRNA umożliwiłoby zastosowanie nowego podejścia i projektowania bardziej ukierunkowanych terapii.Celem tej pracy było stworzenie narzędzi do zrozumienia przełączenia Urm1 między ścieżką tiolacji a urmylacji. Stworzono różne mutanty Urm1 i potwierdzono, że w dalszym ciągu są zdolne do przeprowadzania urmylacji. Dodatkowo zaprojektowano kilkanaście mutantów Uba4 by sprawdzić wpływ wybranych reszt na funkcje białka. Pokazano, że cysteina 202 odgrywa ważną rolę w procesie tioestryfikacji i hydrolizy ATP. Cysteina 397 okazała się być krytyczną w procesie tiokarboksylacji.
Urm1 is a Ubiquitin-like protein involved in two pathways – tRNA thiolation and protein urmylation. Molecular regulators which direct Urm1 to either one of the processes are yet unknown. Generating the biochemical tools to study and understand the molecular switch between thiolation and urmylation will promote a morethorough understanding of the underlying mechanisms of these reactions. Urm1 in the thiolation pathway interacts with Uba4 that has the ability to thioestrificate and thiocarboxylate C-terminal carboxyl group of Urm1-COOH. Correctly modified Urm1-COSH then transfers the sulfur atom to the Ncs2/6 complex, finally resulting in tRNA thiolation. When Urm1 is participating in urmylation reaction it first needs to be in thiocarboxylated form. In this pathway, Urm1 is conjugating to Lysine residues on specific targets by its C-terminal Glycine. Understanding the role and importance of specific amino acid residues of mentioned proteins will facilitate a deeper understanding of the key processes they play a role, in particular in the context the influence tRNA modification defects have in a variety of disorders. This could also create new approaches and novel possibilities in designing targeted therapies. In this thesis, the aim was to create molecular tools for the study of the switch between Urm1 thiolation and urmylation. Different Urm1 mutants were generated and were shown to still be capable of performing urmylation. Additionally, a number of Uba4 mutants were produced to study the influence of chosen mutation sites on the protein functions. Cysteine 202 was shown to be important in thioesterification and ATP hydrolysis. Cysteine 397 was confirmed to be critical in the thiocarboxylation reaction.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 4.

Tytuł:: Optimisation of Human Bronchial Fibroblasts cell culturing conditions for the coculture of fibroblasts and epithelial cells in the EMTU model
Optymalizacja warunków hodowli ludzkich fibroblastów oskrzelowych dedykowana hodowli fibroblastów i nabłonków w modelu EMTU
Autorzy:: Kaczmarczyk, Magdalena
Opis:: Cell cultures are one of the most common methods used in scientific research. They can be propagated using different methods. The basic type of animal cell culture is 2D culture. Main advantages of this model are low costs and the ease of propagation. To provide more physiological conditions for cells, other models, such as 3D or cocultures can be used. The EMTU model is a promising model to be used in research on asthma. In this model fibroblasts and epithelial cells are cultured together.The aim of this thesis was to test the effects of chosen media dedicated for epithelial cells on human bronchial fibroblasts in order to optimize the cell culturing conditions of the coculture of fibroblasts and epithelial cells in the EMTU model.Obtained results show that the media dedicated for epithelium do not have a significant effect on the viability of the Human Bronchial Fibroblasts, but they increase the proliferation rate of those cells.The influence of chosen media on TGF-induced FMT was evaluated by immunofluorescent staining of -SMA- the most common marker of FMT. Full BEGM medium – the epithelium dedicated medium– has been shown to lower the FMT efficiency in HBF populations in contrast to standard DMEM medium with or without BEGM supplements.
Hodowle komórkowe są jedną z najczęściej wykorzystywanych metod w badaniach naukowych. Mogą być one prowadzone na wiele różnych sposobów. Podstawowym typem jest hodowla w układzie 2D, a jej największą zaletą jest niski koszt i łatwość prowadzenia. Można również wykorzystywać inne układy, które zapewniają bardziej fizjologiczne środowisko. Przykładami mogą być hodowle 3D czy kokultury komórkowe. Obiecującym modelem do badań nad astmą jest model EMTU, w którym prowadzi się kokulturę fibroblastów z nabłonkami hodowanymi na insertach. Celem pracy było zbadanie wpływu wybranych pożywek hodowlanych dedykowanych nabłonkom na ludzkie fibroblasty oskrzelowe, w celu optymalizacji warunków hodowli ludzkich fibroblastów oskrzelowych i nabłonków w modelu EMTU.Otrzymane wyniki świadczą o tym, że pożywki dedykowane nabłonkom nie wpływają znacząco na żywotność ludzkich fibroblastów oskrzelowych. Wpływają natomiast na zwiększenie proliferacji komórek.Sprawdzono również wpływ danych pożywek na zachodzenie indukowanego TGF procesu FMT. Pełna pożywka dedykowana nabłonkom (pożywka BEGM) obniża liczbę komórek, które przeszły proces FMT, w przeciwieństwie do pożywki standardowej dla fibroblastów z dodatkiem, lub bez, suplementów z pożywki BEGM, która dla podstawowego markera tego procesu, jakim jest a-SMA, stymuluje zachodzenie procesu FMT.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego