- Tytuł:
-
Initial characterization of endothelial cells isolated from lungs in order to study the role of heme oxygenase-1 in the regulation of the angiogenesis in the mouse model of Duchenne muscular dystrophy
Wstępna charakterystyka komórek śródbłonka izolowanych z płuc w celu badania roli oksygenazy hemowej-1 w regulacji procesu angiogenezy w mysim modelu dystrofii mięśniowej Duchennea - Autorzy:
- Rusin, Kinga
- Opis:
-
Dystrofia mięśniowa Duchenne’a (DMD) jest nieuleczalną recesywną chorobą sprzężoną z chromosomem X, która objawia się zaburzeniami funkcji mięśni i prowadzi do śmierci w wyniku niewydolności sercowo-oddechowej. Odpowiedzialna za nią mutacja w genie kodującym dystrofinę prowadzi do powtarzających się cyklicznie etapów niszczenia włókien mięśniowych i ich regeneracji przez aktywowane mięśniowe komórki macierzyste aż do wyczerpania się ich możliwości regeneracyjnych. Wyniki ostatnich badań wskazują, że dystrofina ulega ekspresji również w komórkach śródbłonka, a upośledzenie tworzenia naczyń krwionośnych może przyczyniać się do rozwoju DMD. Jednym z regulatorów procesu angiogenezy jest oksygenaza hemowa-1 (HO-1) – enzym rozkładający hem do dwuwartościowych jonów żelaza (Fe2+), tlenku węgla (CO) i biliwerdyny, redukowanej następnie do bilirubiny przez reduktazę biliwerdyny (BVR). Celem prezentowanej pracy była izolacja komórek śródbłonka naczyń z płuc myszy dzikich (WT), pozbawionych dystrofiny (mdx), pozbawionych jednego allelu Hmox1 (Hmox1+/-) i dystroficznych heterozygot Hmox1 (mdx/Hmox1+/-) oraz ich charakterystyka. Za pomocą PCR w czasie rzeczywistym zbadano ekspresję oksygenazy hemowej-1 (Hmox1), płytkowej śródbłonkowej molekuły adhezyjnej (Pecam1) i receptora 2 dla VEGF (Kdr). Sprawdzono także obecność markera komórek śródbłonka – VE-kadheryny i wiązanie izolektyny B4. Analiza barwienia potwierdziła uzyskanie populacji komórek śródbłonka. Zaobserwowano obniżony poziom ekspresji Hmox1 w komórkach myszy dystroficznych względem myszy typu dzikiego. Analiza ekspresji Pecam1 i Kdr nie wykazała istotnych statystycznie różnic. Przeprowadzone badania są wstępem do dalszych analiz, które pozwolą odpowiedzieć na pytanie dotyczące roli angiogenezy i HO-1 w rozwoju DMD.
Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an incurable recessive disease coupled to the X chromosome, which manifests as a disorder of muscle function and leads to death as a result of cardio-respiratory failure. The mutation responsible for it, in the gene encoding dystrophin, leads to repeating cycles of the destruction of muscle fibers and their regeneration by activated muscular stem cells until their regenerative capacity is exhausted. The results of recent studies indicate that dystrophin is also expressed in endothelial cells, and impaired blood vessel formation may contribute to the development of DMD. One of the regulators of the angiogenesis process is heme oxygenase-1(HO-1) – an enzyme that breaks down the haem into divalent iron ions (Fe2+), carbon monoxide (CO) and biliverdin, which is then reduced to bilirubin by biliverdin reductase (BVR). The aim of the presented study was to isolate vascular endothelial cells from the lungs of wild-type (WT) mice, lacking dystrophin (mdx), devoid of one Hmox1 allele (Hmox1+/-) and dystrophic Hmox1 heterozygotes (mdx/Hmox1+/-) and their characteristics. The expression of heme oxygenase-1 (Hmox1), platelet endothelial adhesion molecule (Pecam1) and receptor 2 for VEGF (Kdr) was tested by Real-time PCR. The presence of an endothelial cell marker – VE-cadherin and binding of B4 isolectin was also checked. Analysis of the staining confirmed the obtainment of the endothelial cell population. A decreased level of Hmox1 expression was observed in cells of dystrophic mice compared to wild-type mice. Analysis of Pecam1 and Kdr expression did not show statistically significant differences. The research is the introduction to further analyzes that will answer the question regarding the role of angiogenesis and HO-1 in the development of DMD. - Dostawca treści:
- Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Inne