Informacja

Drogi użytkowniku, aplikacja do prawidłowego działania wymaga obsługi JavaScript. Proszę włącz obsługę JavaScript w Twojej przeglądarce.

English (EN)·Polski (PL)·Yкраїнський (UK)
Przejdź do strony domowej biblioteki Pedagogiczna Biblioteka Wojewódzka im. Komisji Edukacji Narodowej w Lublinie Link otwiera się w nowym oknie Logo biblioteki Prolib Integro - strona głównaPedagogiczna Biblioteka Wojewódzka im. Komisji Edukacji Narodowej w Lublinie
Zmień bibliotekę

Wyszukujesz frazę "In vitro maturation" wg kryterium: Temat

  Lista filtrów
Wyrównaj
Wyświetlanie 1-10 z 14
Tytuł:
Optical coherence microscopy allows for quality assessment of immature mouse oocytes
Autorzy:
Szkulmowski, Maciej
Fluks, Monika
Ajduk, Anna
Tamborski, Szymon
Wydawca:
Bioscientifica
Opis:
Narodowe Centrum Nauki (NCN) - grant OPUS (2017/27/B/NZ5/00405)
Disclaimer: this is not the definitive Version of Record of this article. This manuscript has been accepted for publication in Reproduction (https://doi.org/10.1530/REP-22-0178), but the version presented here has not yet been copy-edited, formatted or proofed. Consequently, Bioscientifica accepts no responsibility for any errors or omissions it may contain.
The success of assisted reproductive technologies, and particularly in vitro maturation, is tightly linked to the quality of oocytes. Therefore, there is a need for robust, reliable, and easy-to-assess biomarkers of oocyte developmental competence. Microscopy techniques visualizing oocyte intracellular structure could provide such biomarkers. However, fluorescence imaging methods, applied frequently in biology and allowing for detailed structural and dynamic studies of single cells, require fluorescent tags to visualize cellular architecture and may cause short- and long-term photo-damage. On the other hand, traditional light microscopy, although relatively non-invasive, does not provide detailed structural information. Optical coherence microscopy (OCM) is a promising alternative, as it does not require sample pre-processing or labelling, and can provide 3D images of intracellular structures. Here we applied OCM to assess the chromatin conformation of immature mouse oocytes, a feature that corresponds with their transcriptional status and developmental competence and cannot be examined by traditional light microscopy. We showed that OCM distinguished oocytes with so-called NSN (non-surrounded nucleoli) and SN (surrounded nucleoli) chromatin conformation with very high sensitivity and specificity, and that OCM scanning did not decrease the quality of oocytes. Finally, we cross-referenced OCM data with the oocyte ability to undergo normal nuclear and cytoplasmic maturation, and proved that indeed, oocytes scored with OCM as NSN mature less effectively than oocytes scored as SN. Our results suggest that OCM may be a valuable addition to the imaging toolkit used in assisted reproduction procedures.
Dostawca treści:
Repozytorium Centrum Otwartej Nauki
Artykuł
Tytuł:
Extracellular vesicles from follicular fluid may improve the nuclear maturation rate of in vitro matured mare oocytes
Autorzy:
Kochan, Joanna
Karnas, Elżbieta
Łojko, Julianna
Nowak, Agnieszka
Gabryś, Julia
Bugno-Poniewierska, Monika
Sawicki, Sebastian
Kij-Mitka, Barbara
Opis:
The in vitro maturation (IVM) of equine oocytes is still not efficient and does not yield consistent results. The specific requirements of equine oocytes during this process are still largely unknown, which hinders the development of assisted reproductive techniques (ART) in this species. Because the ovarian follicle microenvironment supports oocytes in their acquisition of developmental competence, follicular fluid seems to be a substantial source of bioactive factors that could support the IVM process. Extracellular vesicles (EVs) are cell-secreted molecules in body fluids that are able to deliver molecular signals and transfer genetic information (mRNA, miRNA) between donor and recipient cells. Hence, our hypothesis is that follicular fluid EVs (ffEVs) from small (<20 mm) ovarian follicles can improve the in vitro maturation rate of mare oocytes. To test our hypothesis, equine ovarian follicular fluid was aspirated and ffEVs were isolated by ultracentrifugation, then characterized using nanoparticle tracking analysis and flow cytometry. Additionally, ffEVs were labeled using the ExoGlow-protein EV labeling kit (System Biosciences, Palo Alto, CA). Cumulus-oocyte complexes (COCs) were matured using a one-step method (Method I, continuous culture for 24-38 h) or a two-step method (Method II, initial denudation after 24 h), in the presence (200 mu g protein/ml) or absence of ffEVs. The results show the internalization of ffEVs by equine cumulus cells and, for the first time, also by oocytes. The ffEV treatment during two-step culture had a positive effect on the maturation rate of compacted COCs compared to the control group (45.7% and 20.5%, respectively; p < 0.05). No effect of supplementation was observed on the maturation rate during one-step culture. Our results indicate that the supplementation of culture media with EVs isolated from the follicular fluid of small follicles can improve the IVM rate of mare oocytes, suggesting that ffEVs play an important role during this process and may enhance the development of equine ART.
Dostawca treści:
Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Artykuł
Tytuł:
Identyfikacja białka markerowego pęcherzyków pierwotnych oraz czynników zaangażowanych w proces pęcherzykowej tranzycji u świni - badania in vitro
Identification of the protein marker of primordial follicles and the factors involved in the process of follicular transition in pigs - in vitro tests
Autorzy:
Motal, Maria
Opis:
Follicular development is a key process for the emergence of a functional oocytes.Growth and development of the follicle from the primary to a mature Graafian stagerequires the presence of multiple regulatory factors. Knowledge of the mechanismsallowing for the proper development of preantral follicles under physiological conditions isimportant, because on its basis the process of in vitro follicular maturation can be done. Sofar, the biggest difficulty in the study of in vitro preantral follicular development was lowisolation performance and low survival rate of isolated structures. Follicles atresia wascaused by the improper isolation of follicles from ovarian cortex, as a result of whichobtained follicles were damaged and incapable of development and survive. The purposeof this study was to envolve an efficient and effective method of isolation preantralfollicles from the ovarian tissue of sexually immature pigs. After isolation of the corticalpart of ovary supplied from slaughterhouses tissue was cut into small pieces. Slices wereplaced in a variety of enzymes, to determine respectively safe and effective mixture. Afterthat histochemical and immunohistochemical staining was performed to determine themorphology and ultrastructure of isolated follicles. Results of this study confirm theeffectiveness of the enzymatic isolation of preantral follicles of large mammals. Based onthe study it showed that the most effective isolation of the preantal follicles providesliberase. Through microscopic observation it has been proven that the use of this enzymeallows to obtain high amounts of integral follicles. Because of the preservation of thecorrect morphology and ultrastructure enzymatically isolated follicles are likely to besuccessfully used for further development in vitro. Receiving follicles under extracorporealconditions requires a lot of research on the factors involved in the process of folliculardevelopment.
Dojrzewanie pęcherzyków jajnikowych jest procesem niezbędnym dowykształcenia się funkcjonalnych oocytów. Wzrost i rozwój pęcherzyka ze stadiumpierwotnego do w pełni dojrzałego pęcherzyka Graafa wymaga obecności wieluczynników regulujących. Znajomość mechanizmów pozwalających na prawidłowy rozwójpęcherzyków przedantralnych w warunkach fizjologicznych jest istotna, ponieważ na jejpodstawie można przeprowadzić proces dojrzewania pęcherzyków in vitro. Dotychczasnajwiększym utrudnieniem w badaniach rozwoju pęcherzyków przedantralnychw warunkach in vitro była mała wydajność izolacji oraz niska przeżywalność hodowanychstruktur. Atrezja pęcherzyków spowodowana była ich nieprawidłową izolacją z koryjajnika, na skutek której otrzymane pęcherzyki były uszkodzone oraz niezdolne do rozwojui przeżycia. Celem niniejszej pracy było opracowanie skutecznej i efektywnej metodyizolacji przedantralnych pęcherzyków jajnikowych z tkanki jajnika świń niedojrzałychpłciowo. Po wyizolowaniu części korowej z jajników dostarczonych z rzeźni pociętotkankę na małe fragmenty. Wycinki umieszczono w roztworze kolagenazy lub liberazystosując różne reżimy czasowe, aby ustalić odpowiednio skuteczną i bezpieczną procedurę.Następnie wykonano barwienia histochemiczne oraz immunohistochemiczne w celuokreślenia morfologii i ultrastruktury izolowanych pęcherzyków. Wynikiprzeprowadzonych badań potwierdzają skuteczność enzymatycznej izolacji pęcherzykówprzedantralnych dużych ssaków. Na podstawie pracy wykazano, że najbardziej efektywnąizolację pęcherzyków przedantralnych zapewnia liberaza. Dzięki obserwacjommikroskopowym udowodniono, że zastosowanie tego enzymu pozwala na uzyskanie dużejilości integralnych pęcherzyków. Wyizolowane enzymatycznie pęcherzyki ze względu nazachowanie prawidłowej morfologii i ultrastruktury najprawdopodobniej będą mogły byćz powodzeniem wykorzystane dalszego rozwoju in vitro. Otrzymanie dojrzałychpęcherzyków w warunkach pozaustrojowych wymaga jednak wielu badań dotyczącychczynników zaangażowanych w proces rozwoju pęcherzykowego.
Dostawca treści:
Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Inne
Tytuł:
Analiza lipolizy podczas dojrzewania mejotycznego oocytów świni
Analysis of lipolysis during meiotic maturation of porcine oocytes
Autorzy:
Balawejder, Martyna
Opis:
In vitro maturation of porcine oocytes is an inefficient process, and the resulting embryos are characterized by low survival rate. Due to the use of pigs as biomedical models, as well as in agriculture and industry, further research is necessary to improve the method of assisted reproductive technology. Conducted research of lipid droplets in immature and mature in vitro cultured porcine oocytes. Light and electron microscopy methods were used to find autophagosomes and co-location of lipid droplets with other organelles. Lipid droplets in porcine oocytes are distributed in a peripheral manner in the cell. Nearby of the lipid droplets, mitochondria and the structures of the endoplasmic reticulum were observed. Lipid droplets co-located with mitochondria probably created autophagosome. Autophagy is a process in which damaged protein and cellular organelles are degraded, most often in response to cellular stress. The interior of some lipid droplets has a heterogeneous internal structure, which may suggest degradation of the lipid droplets. The exceptionally high number of lipid droplets in porcine oocytes does not allow for efficient cryopreservation of these oocytes. Lipid metabolism in porcine oocytes is a complex and not fully understood process. Due to numerous functions in animal cells lipid droplets have a significant impact on the in vitro maturation of porcine oocytes.
Dojrzewanie oocytów świni in vitro jest procesem mało wydajnym, a powstające z nich zarodki charakteryzują się niską przeżywalnością. Ze względu na zastosowanie świni jako modeli biomedycznych, jak również w rolnictwie i przemyśle niezbędne są badania pozwalające na ulepszenie metod wspomaganego rozrodu tego gatunku. Przeprowadzono analizy kropli lipidowych w niedojrzałych i dojrzałych, hodowanych in vitro, oocytach świni. Wykorzystano mikroskopię świetlną oraz elektronową w celu potwierdzenia obecności autofagosomów oraz kolokalizacji kropli lipidowych z innymi oraganellami. Krople lipidowe w oocytach świni wykazują obwodowy sposób rozmieszczenia w komórce. W sąsiedztwie kropli lipidowych obserwowano liczne mitochondria oraz struktury siateczki śródplazmatycznej. Krople lipidowe, skolokalizowane z mitochondriami prawdopodobnie tworzyły autofagosomy. Autofagia jest procesem, w trakcie którego degradacji ulegają uszkodzone białka i organelle komórkowe, najczęściej ma miejsce wodpowiedzi na stres komórkowy. Wnętrze niektórych kropli lipidowych miało niejednorodną strukturę wewnętrzną, co może wskazywać na degradację tych kropli. Wyjątkowo duża liczba kropli lipidowych w oocytach świni nie pozwala na wydajną kriokonserwację tych oocytów. Metabolizm lipidów w oocytach świni jest procesem złożonym i nie do końca poznanym, krople lipidowe wykazują liczne funkcje w komórkach zwierzęcych i mają istotny wpływ na przebieg dojrzewania oocytów świni in vitro.
Dostawca treści:
Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Inne
Tytuł:
Follicular fluid-derived extracellular vesicles influence on in vitro maturation of equine oocyte : impact on cumulus cell viability, expansion and transcriptome
Autorzy:
Kij-Mitka, Barbara
Kochan, Joanna
Karnas, Elżbieta
Wojciechowska-Puchałka, Joanna
Gurgul, Artur
Szmatoła, Tomasz
Gabryś, Julia
Bugno-Poniewierska, Monika
Kucharski, Mirosław
Andronowska, Aneta
Opis:
Cumulus cell (CC) expansion is pivotal for oocyte maturation, during which CCs release factors that initiate paracrine signaling within the follicular fluid (FF). The FF is abundant in extracellular vesicles (EVs) that facilitate intercellular communication. Although bovine and murine EVs can control cumulus expansion, these effects have not been observed in equines. This study aimed to assess the impact of FF-derived EVs (ffEVs) on equine CC expansion, viability, and transcriptome. Cumulus–oocyte complexes (COCs) that underwent in vitro maturation (IVM) in the presence (200 µg protein/mL) or absence (control) of ffEVs were assessed for cumulus expansion and viability. CCs were isolated after 12 h of IVM, followed by RNA extraction, cDNA library generation, and subsequent transcriptome analysis using next-generation sequencing. Confocal microscopy images illustrated the internalization of labeled ffEVs by CCs. Supplementation with ffEVs significantly enhanced cumulus expansion in both compacted (Cp, p < 0.0001) and expanded (Ex, p < 0.05) COCs, while viability increased in Cp groups (p < 0.01), but decreased in Ex groups (p < 0.05), compared to the controls. Although transcriptome analysis revealed a subtle effect on CC RNA profiles, differentially expressed genes encompassed processes (e.g., MAPK and Wnt signaling) potentially crucial for cumulus properties and, consequently, oocyte maturation.
Dostawca treści:
Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Artykuł
Tytuł:
Involvement of extracellular vesicles isolated from the medium of granulosa cells in the maturation of pig oocytes in vitro
Zaangażowanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych wyizolowanych z pożywki znad komórek ziarnistych w proces dojrzewania oocytów świni in vitro
Autorzy:
Pitala, Katarzyna
Opis:
Celem niniejszej pracy było wykrycie obecności pęcherzyków zewnątrzkomórkowych w pożywce znad komórek ziarnistych pęcherzyka jajnikowego oraz zbadanie wpływu tych pęcherzyków na dojrzewanie komórek jajowych świni, w warunkach in vitro.Do potwierdzenia obecności pęcherzyków zewnątrzkomórkowych (EVs) wykorzystano trzy metody: analizę śledzenia nanocząsteczek (NTA), transmisyjną mikroskopię elektronową (TEM) oraz analizę Western Blot. Natomiast, aby zbadać wpływ wyżej wymienionych pęcherzyków na dojrzewanie oocytów założono hodowle 3D całych kompleksów oocyt-komórki wzgórka świni i przeprowadzono stosowne badania (analiza żywotności komórek wzgórka, fluorescencyjna analiza dojrzewania jądrowego oocytów). Wyniki otrzymane dzięki przeprowadzonej analizie NTA, TEM i Western Blot potwierdziły obecność EVs w pożywce zebranej znad komórek ziarnistych. Dodanie pożywki hodowlanej znad komórek ziarnistych, zawierającej EVs, do pożywki stosowanej w procedurze dojrzewania in vitro oocytów świni wpływa korzystnie nie tylko na wydajność procedury, ale także na przeżywalność komórek wieńca promienistego. Wyniki te mogą mieć kluczowe znaczenie podczas doskonalenia stosowanych technik wspomaganego rozrodu, konieczne są jednak dalsze, pogłębione badania molekularne, które pozwolą określić cargo pęcherzyków zewnątrzkomórkowych.
The purpose of the present study was to detect the presence of extracellular vesicles in the culture medium from above the granulosa cells of the ovarian follicle and to study the effect of these vesicles on the maturation of porcine oocytes, in vitro.Three methods were used to confirm the presence of extracellular vesicles (EVs): nanoparticle tracking analysis (NTA), transmission electron microscopy (TEM) and Western Blot analysis. On the other hand, to study the effect of the above-mentioned vesicles on the oocytes in vitro maturation, 3D cultures of cumulus-oocyte-complexes were set up and relevant tests (analysis of cumulus cells viability, fluorescence analysis of oocyte nuclear maturation) were carried out. The results obtained by NTA, TEM and Western Blot analysis confirmed the presence of EVs in the medium collected from above the granulosa cells. The addition of culture medium from above the granulosa cells, containing EVs, to the medium used in the in vitro maturation procedure of pig oocytes has a beneficial effect not only on the efficiency of the procedure but also on the survival rate of the cumulus cells. These results may be crucial in improving the assisted reproduction techniques used, but further in-depth molecular studies are needed to determine the cargo of extracellular vesicles.
Dostawca treści:
Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Inne
Tytuł:
Wpływ wybranych sterydów anabolicznych na równowagę pomiędzy mitofagią i biogenezą mitochondriów w trakcie procedury dojrzewania in vitro oocytów świni
Influence of selected anabolic steroids on the balance between mitophagy and mitochondrial biogenesis during in vitro maturation of porcine oocytes
Autorzy:
Gwóźdź, Klaudia
Opis:
Environmental compounds with endocrine activity (EACs), due to their documented adverse effect on the functioning of animal and human organisms, are an increasingly frequent subject of interdisciplinary research. A number of representatives of these compounds have the ability to attach to specific receptors of endogenous hormones, thus interfering with the function of a number of endocrine glands and disrupting the hormonal balance of organisms. Pollution in the environment, the use of pesticides and fungicides in agriculture, the use of anabolic steroids and hormone therapy drugs are common causes of the adverse effects of EACs on organisms. Therefore, this master's thesis was aimed at examining whether selected EACs: vinclozolin (Vnz) - a fungicide quite commonly used in agriculture, androgenic anabolic steroid- nandrolone (Ndn) and immunosuppressive cyclosporine A (CsA), show an effect on the balance between mitophagy and biogenesis of mitochondria in porcine oocytes, thus influencing their developmental competences during the in vitro maturation procedure (IVM) using 3D culture of whole oocyte-cumulus cell complexes (COCs).In order to investigate whether selected EACs affect the process of autophagy, a quantitative analysis of mRNA expression of the LC3 gene was performed. MitoTracker Orange (MtOR) immunofluorescence staining was used to visualize the distribution of mitochondria (mt) in cumulus cells. Ultrastructure analysis of mt was also performed using a transmission electron microscope (TEM). The last research task was to visualize the process of mitophagy in COCs, using the Mitophagy Detection Kit®.The obtained results clearly showed that CsA induced mitophagy in cumulus (CC) cells, disrupting oocyte metabolism and impairing their quality. This is also evidenced by the increased mRNA level for LC3 and the presence of numerous autophagosomes in the oocyte cytoplasm. In the case of the remaining compounds: Vnz and Ndn, mitophagy induction was not observed. Immunofluorescence analysis of the distribution and activity of mitochondria showed that in the presence of both Vnz and CsA mt emit an intense signal, which was not found in the case of COCs cultured with the addition of Ndn, which may indicate their lower activity.Summing up the obtained results, it can be concluded that long-term use of both CsA and Ndn may disturb the metabolism of oocytes, consequently leading to a decrease in their quality. Therefore, uncontrolled use of anabolic steroids or long-term therapies with the use of immunosuppressants may reduce the chances of getting pregnant and maintaining pregnancy, as well as cause lower success rates in the use of assisted reproductive techniques.
Środowiskowe związki o aktywności endokrynnej (EACs), ze względu na udokumentowany, niekorzystny wpływ na funkcjonowanie organizmów zwierząt i ludzi, są coraz częstszym obiektem interdyscyplinarnych badań. Szereg przedstawicieli tych związków ma możliwość przyłączania się do swoistych receptorów endogennych hormonów zakłócając tym samym działanie szeregu gruczołów dokrewnych oraz zaburzając gospodarkę hormonalną organizmów. Występujące w środowisku zanieczyszczenia, stosowanie pestycydów i fungicydów w rolnictwie, korzystanie ze sterydów anabolicznych oraz leków terapii hormonalnej to częste przyczyny niekorzystnego oddziaływania EACs na organizmy. W związku z tym, niniejsza praca magisterska miała na celu zbadanie czy wybrane EACs: winklozolina (Vnz) – dosyć powszechnie stosowany w rolnictwie fungicyd, androgenny steryd anaboliczny – nandrolon (Ndn) oraz immunosupresyjna cyklosporyna A (CsA), wykazują wpływ na równowagę pomiędzy mitofagią i biogenezą mitochondriów w oocytach świni, tym samym wpływając na ich kompetencje rozwojowe podczas procedury dojrzewania in vitro (IVM) z wykorzystaniem hodowli 3D całych kompleksów oocyt-komórki wzgórka (COCs).Celem zbadania czy wybrane EACs mają wpływ na proces autofagii dokonano ilościowej analizy ekspresji mRNA genu LC3. W celu zobrazowania rozmieszczenia mitochondriów (mt) w komórkach wzgórka wykorzystano barwienie immunofluorescencyjne MitoTracker Orange (MtOR). Przeprowadzono również analizę ultrastruktury mt z wykorzystaniem transmisyjnego mikroskopu elektronowego (TEM). Ostatnim zadaniem badawczym było zobrazowanie procesu mitofagii w COCs, z wykorzystaniem Mitophagy Detection Kit®. Otrzymane wyniki wykazały, że CsA indukowała mitofagię w komórkach wzgórka (CC), zakłócając metabolizm oocytów i osłabiając ich jakość. Świadczy o tym również zwiększony poziom mRNA dla LC3 i obecność licznych autofagosomów w cytoplazmie oocytów. W przypadku pozostałych związków: Vnz i Ndn, nie zaobserwowano indukcji procesu mitofagii. Analiza immunofluoresencyjna rozmieszczenia i aktywności mitochondriów pokazała, że w obecności zarówno Vnz jak i CsA, mt emitują intensywny sygnał, czego nie stwierdzono w przypadku COCs hodowanych z dodatkiem Ndn co może świadczyć o ich niższej aktywności.Podsumowując uzyskane wyniki można stwierdzić, że długotrwałe stosowanie zarówno CsA jak Ndn może zaburzać metabolizm oocytów, w konsekwencji doprowadzając do obniżenia ich jakości. Zatem niekontrolowane zażywanie sterydów anabolicznych czy też długotrwałe terapie z wykorzystaniem immunosupresantów mogą obniżać szanse na zajście oraz utrzymanie ciąży, a także powodować niższe wskaźniki sukcesu w wykorzystaniu technik wspomaganego rozrodu.
Dostawca treści:
Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Inne
Wyświetlanie 1-10 z 14

Ta witryna wykorzystuje pliki cookies do przechowywania informacji na Twoim komputerze. Pliki cookies stosujemy w celu świadczenia usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczane w Twoim komputerze. W każdym momencie możesz dokonać zmiany ustawień dotyczących cookies