Temat: genome editing - Prolib Integro

Skocz do pozycji: 1.

Tytuł:: Reasons to genome edit and metaphysical essentialism about human identity
Autorzy:: Dranseika, Vilius
Żuradzki, Tomasz
Opis:: The standard view in bioethics distinguishes between "person affecting" interventions that may harm or benefit particular individuals (e.g., by genome editing) and "identity affecting" interventions that determine which individual comes into existence (e.g., by genetic selection). Sparrow questions one of the central assumptions of the debates about reproductive technologies in the past several decades. He argues that direct genetic modification of human embryos should be classified not as "person affecting" but as "identity affecting" because any genome editing in the foreseeable future "will almost certainly" involve creating and editing multiple embryos, as well as selecting the "best possible" embryo by preimplantation genetic diagnosis. Sparrow also assumes that the distinction between "person affecting" and "identity affecting" interventions has crucial ethical significance: "the reasons we have to select embryos are weaker than the reasons we have to modify them" (Sparrow 2022). Thus, classifying genome editing as an "identity affecting" intervention, he concludes that there is no justification for laws requiring enhancement, even if one assumes that enhancement is morally obligatory. In this commentary paper, we are taking one step further in questioning the central assumptions in the bioethical debates about reproductive technologies. We argue that the very distinction between "person affecting" and "identity affecting" interventions is based on a questionable form of material-origin essentialism. Questioning of this form of essentialist approach to human identity allows treating genome editing and genetic selection as more similar than they are taken to be in the standard approaches. It would also challenge the idea that normative reasons we have in these two types of cases markedly differ in strength.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Artykuł

na półce

Skocz do pozycji: 2.

Tytuł:: Precyzyjna edycja genomu z wykorzystaniem systemu CRISPR/Cas
Precise genome editing with CRISPR/Cas system
Autorzy:: Czarnek, Maria
Opis:: The ability to modify genome in a precise and efficient fashion is needed tounderstand how genotype affects different biological processes and disease. Recently,genome engineering tool based on CRISPR/Cas (clustered regularly interspaced shortpalindromic repeats/CRISPR associated) – procaryotic adaptive immune system – hasbeen developed. CRISPR/Cas utilizes small RNA molecules (crRNA and tracrRNA) toguide Cas9 nuclease to specific genomic loci. Cas9 can induce the formation of targeteddouble strand breaks in mammalian chromosomes. Subsequent indel formation via nonhomologousend-joining (NHEJ) repair mechanism often leads to nonsense orframeshift mutations. It may lead to nonsense-mediated degradation of mRNA orpremature termination of translation.The aim of this project was to generate MC38CEA cell lines with mutations in Adamlocus by using CRISPR/Cas system. To that end plasmids coding for crRNA targeting13 distinct sites in Adam17 gene were constructed. The ability to introduce mutation inmammalian genome was demonstrated in an easy-to-transfect murine neuroblastomacell line, namely Neuro-2a. Plasmids coding for the most active crRNA: 17.1, 17.F and17.C (targeting exon 1, 2 and 3 of Adam17 gene, respectively) were used to transfectMC38CEA cells. Moreover, to introduce large deletions, cells were transfectedsimultaneously with plasmids coding for 17.1 and 17.F crRNA. The cells were seededinto 96-well plates, on average one cell per a well, in order to obtain single cell-derivedclones. Mutations in genomic DNA were analysed by digestion with mismatch-sensitivenuclease CELI (indel mutations); large deletions were detected by PCR. ADAM17protein level was verified by Western blotting analysis. In ADAM17-knockout clonesmutations in Adam17 gene were confirmed by DNA sequencing. Mutations in potentialoff-target sites were analysed by digestion with mismatch-sensitive nuclease CELI.
Zdolność do modyfikacji genomu w precyzyjny i wydajny sposób jest niezbędnado zrozumienia jaki wpływ na procesy biologiczne i stany chorobowe ma konkretnygenotyp. W ostatnich latach techniki edycji genomu poszerzyły się o narzędziawywodzące się z mechanizmu obrony wielu prokariotów przed obcymi kwasaminukleinowymi – o system CRISPR/Cas (ang. clustered regularly interspaced shortpalindromic repeats/CRISPR associated). System ten wykorzystuje małe cząsteczkiRNA (crRNA i tracrRNA) do nakierowywania nukleazy Cas9 na komplementarną docrRNA sekwencję. Cas9 może być wykorzystana do wprowadzenia dwuniciowychpęknięć DNA w wybranych miejscach w genomie komórek zwierzęcych. Naprawatakich pęknięć poprzez mechanizm niehomologicznego łączenia końców możeskutkować wprowadzeniem niewielkich insercji lub delecji w sekwencji kodującejbiałko, przez co dochodzi do przesunięcia ramki odczytu. Może to prowadzić dodegradacji transkryptu w procesie degradacji transkryptów niosących przedwczesnykodon stop lub do syntezy krótszego, niefunkcjonalnego białka.Celem pracy było wykorzystanie systemu CRISPR/Cas do wyprowadzenia liniikomórek MC38CEA niosących mutacje w locus Adam17. W tym celu stworzonowektory kodujące crRNA targetujące 13 miejsc w obrębie genu Adam17. Abyzweryfikować zdolność systemu do wprowadzania mutacji do genomu komórekssaczych, wektorami tymi stransfekowano komórki mysiego nerwiaka, Neuro-2A.Plazmidy kodujące najbardziej aktywne crRNA: 17.1, 17.F oraz 17.C (targetująceodpowiednio egzon 1, 2 i 3 mysiego genu Adam17) wykorzystano do transfekcjikomórek MC38CEA. Ponadto, w celu wprowadzenia dużych delecji, komórkistransfekowano jednocześnie plazmidami kodującymi crRNA 17.1 i 17.F. Uzyskanopojedyncze klony komórek MC38CEA wysiewając je na płytki 96-dołkowe, średnio pojednej komórce na dołek. Mutacje w genomowym DNA były analizowane testemwykrywania niedopasowania sekwencji opartym o aktywność nukleazy CELI (mutacjetypu indel) lub przy pomocy reakcji PCR (duże delecje). Poziom białka ADAM17 wklonach niosących mutację w locus Adam17 zbadano przy pomocy analizy Westernblotting. W przypadku klonów pozbawionych ekspresji białka ADAM17 występowanie mutacji potwierdzono poprzez sekwencjonowanie targetowanego obszaru DNA. Wwyselekcjonowanych klonach testem wykrywania niedopasowań sekwencji w oparciu oaktywność CELI zanalizowano występowanie niepożądanych mutacji w miejscach osekwencji zbliżonej do targetowanego regionu DNA.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 3.

Autorzy:: Czarnek, Maria
Bereta, Joanna
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Artykuł

na półce

Skocz do pozycji: 4.

Tytuł:: Establishment of CRISPR/Cas9-based knock-in in a hemimetabolous insect : targeted gene tagging in the cricket Gryllus bimaculatus
Autorzy:: Ylla Bou, Guillem
Tomonari, Sayuri
Nakamura, Taro
Barnett, Austen A.
Watanabe, Takahito
Whittle, Carrie A.
Extavour, Cassandra G.
Matsuoka, Yuji
Noji, Sumihare
Mito, Taro
Opis:: Studies of traditional model organisms like the fruit fly Drosophila melanogaster have contributed immensely to our understanding of the genetic basis of developmental processes. However, the generalizability of these findings cannot be confirmed without functional genetic analyses in additional organisms. Direct genome editing using targeted nucleases has the potential to transform hitherto poorly-understood organisms into viable laboratory organisms for functional genetic study. To this end, here we present a method to induce targeted genome knock-out and knock-in of desired sequences in an insect that serves as an informative contrast to Drosophila, the cricket Gryllus bimaculatus. The efficiency of germ line transmission of induced mutations is comparable to that reported for other well-studied laboratory organisms, and knock-ins targeting introns yield viable, fertile animals in which knock-in events are directly detectable by visualization of a fluorescent marker in the expression pattern of the targeted gene. Combined with the recently assembled and annotated genome of this cricket, this knock-in/knock-out method increases the viability of G. bimaculatus as a tractable system for functional genetics in a basally branching insect.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Artykuł

na półce

Skocz do pozycji: 5.

Tytuł:: Human rights in the era of emerging epigenome editing technologies
Autorzy:: Miszczyk, Justyna
Tematy:: epigenetics
ethics
human rights
epigenome editing
genome editing
germline editing
CRISPR
human dignity
human health; Pokaż więcej
Wydawca:: Uniwersytet Andrzeja Frycza Modrzewskiego w Krakowie
Powiązania:: https://bibliotekanauki.pl/articles/61807830.pdf Link otwiera się w nowym oknie
Opis:: Genome and epigenome editing technologies have been hailed as the most revolutionary discoveries in the natural and medical sciences. These achievements were confirmed by the 2020 Nobel Prize in chemistry. In contrast to genome editing, epigenetic regulation involves controlling the particular expression of a gene by modifying chromatin components without altering the genome nucleotide sequence. Despite many promising results and applications, the effects of epigenome editing interventions are not fully known. For example, potential irrevocable and transgenerational events are possible and might be heritable. Other concerns include the risk of using or misusing this technology in agriculture and, the military as well as using it with or without other treatments to alter human health and body. Despite ongoing debate and studies on human genome editing, especially germline, the discussion regarding human rights and the ethics of epigenome editing for different applications is at a relatively early stage and therefore sparse. Furthermore, in the context of possible infringements on human dignity and integrity, critical consideration is warranted as to whether the uses of these technologies are acceptable or should be banned in some countries. The first part of this article presents a short review of the epigenome versus genome editing field. Particular emphasis is placed on epigenome editing advances and threats, to draw open questions in epigenetic human rights status and regulation. The second part presents the analyses of international human rights law with other possible normative law acts that can influence the status of epigenome editing technologies, mostly in Europe. Their strengths and limitations are highlighted, to present raised open questions and gaps in the last part. The normative question is whether the existing international law regulations are sufficient to address a wide number of implications and to protect human rights in the face of this emerging technology. Furthermore, some gaps and flaws are pointed out in current regulation policy, as regards epigenetic editing. Accordingly, this study aims to present further guidance and questions by exploring the implications of the human rights framework for research and the application of epigenome editing. This article then lays down the landscape in the possible approaches of genome editing under human rights law – and argues that new regulations or updated international standards are needed, in combination with the institutional framework. Lastly, the concluding section situates this study’s findings within the relevant epigenome editing context.
Dostawca treści:: Biblioteka Nauki

Artykuł

na półce

Skocz do pozycji: 6.

Tytuł:: Inaktywacja mysiego genu Fas z wykorzystaniem systemu CRISPR-Cas9
Inactivation of murine Fas gene using the CRISPR-Cas9 system
Autorzy:: Błażowska, Natalia
Opis:: Methods which allow precise gene editing, like ZFN ( zinc finger nuclease), TALEN(transcription activator-like effector nuclease) or CRISPR-Cas9 (Clustreted Regulatory Interspaced Short Palindromic Repeats- CRISPR-associated Protein) became very popular thanks to possibility of usage in many different researches. Mostly used is CRISPR-Cas9 system because of its simplicity, possibility of specific sequence targeting and creating double-strand breaks. This system is tested as a potential element of gene therapies of diseases in which it is necessary to knock-out gene or replace it. The aim of this study was the inactivation of Fas gene in murine embryonic fibroblasts through mutation induction using CRISPR-Cas9.
Metody umożliwiające precyzyjną edycję genomu, takie jak ZFN (ang. zinc finger nuclease), TALEN (ang. transcription activator-like effector nuclease) czy CRISPR-Cas9 (ang. Clustreted Regulatory Interspaced Short Palindromic Repeats- CRISPR-associated Protein) zyskały dużą popularność dzięki możliwości zastosowania w wielu różnych badaniach. Najpowszechniej wykorzystywany jest system CRISPR-Cas9 z powodu swojej prostoty, możliwości specyficznego rozpoznawania sekwencji oraz przecinania dwuniciowego DNA. System ten jest badany jako potencjalny element terapii genowych chorób, w których leczeniu konieczna jest inaktywacja genu lub zastąpienie wadliwego genu. W pracy badano inaktywację genu Fas w mysich embrionalnych fibroblastach poprzez wprowadzenie mutacji w tym genie z wykorzystaniem systemu CRISPR-Cas9.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 7.

Tytuł:: Genome editing of the SNAI1 gene in rhabdomyosarcoma : a novel model for studies of its role
Autorzy:: Majka, Marcin
Mussolino, Claudio
Skrzypek, Klaudia
Cathomen, Toni
Ulman, Aleksandra
Konieczny, Paweł
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Artykuł

na półce

Skocz do pozycji: 8.

Tytuł:: Genome editing via microvesicles derived from mesenchymal stem cells expressing TALENs
Edycja genomu przy pomocy nukleaz TALEN przenoszonych poprzez mikrofragmenty komórkowe pochodzące z mezenchymalnych komórek macierzystych
Autorzy:: Sit, Karolina
Opis:: Designer nucleases such as Transcription activator-like effector nucleases (TALENs) constitute very useful tools in genome engineering. These hybrid enzymes recognize and cut DNA sequence in a specific, pre-defined locus, thus creating Double Strand Breaks (DSBs). The breaks can be then repaired by a precise cellular mechanism based on homologous recombination (HR) or imprecisely, by an error-prone non homologous end joining (NHEJ) pathway. In the latter case, a small insertions or deletions are introduced to DNA leading to mutations, which results in gene knockout. In this study, we combined genome editing via TALENs with the use of microvesicles (MVs) as their carriers to target cells. MVs are small cell - derived vesicles shedded from cell surface during cellular activation or in steady state. They contain a variety of bioactive molecules such as mRNA, microRNA (miRNA), lipids and proteins thus are involved in cellular communication. MVs can act as natural carriers of molecules between cells, leading to horizontal transfer of bioactive cargo and subsequently influencing cell fate. The goal of this study was to investigate whether MVs isolated from genetically modified human Umbilical Cord-derived Mesenchymal Stem Cells (hUC-MSC) can transfer designer nucleases to EGFP expressing cells leading to specific gene knockout of this gene. hUC MSC were isolated, characterized by expression of typical surface markers and genetically modified to express TALENS via nucleofection of plasmid DNA. Genetic modification of hUC-MSC resulted in expression of designer nucleases, which was confirmed on genomic DNA, transcript and protein levels. Microvesicles isolated from conditioned media from modified cells contained mRNA for TALEN nucleases. Transfer of MVs-TALEN to HEK293T-EGFP resulted in increase of TALENs mRNA level in recipient cells. Furthermore, after 10 days of co-culture UC-MSC-TALEN with HEK293T-EGFP, flow cytometry analysis indicated significant EGFP knockout followed by global decrease in mean fluorescence intensity.This study suggests that microvesicles can be utilized for genome editing purposes by transferring mRNA of designer nucleases to recipient cells, resulting in specific gene knockout. Further studies regarding improvement of packaging bioactive molecules into vesicles and increasing efficiency of MVs transfer need to be conducted.
Sztuczne, hybrydowe enzymy takie jak nukleazy TALEN (ang. Transcription activator-like effector nucleases) stanowią atrakcyjne narzędzia do edycji genomu stosowane w inżynierii genetycznej. Nukleazy rozpoznają, a następnie przecinają specyficzną sekwencję nukleotydową w genomie powodując podwójne pęknięcia nici DNA (ang. Double Strand Breaks – DSBs). Powstałe pęknięcia są następnie naprawiane przez komórkowe mechanizmy naprawy DNA, czyli precyzyjny mechanizm rekombinacji homologicznej lub niehomologiczne scalanie końców DNA. W tym drugim przypadku wprowadzane są drobne mutacje, które skutkują wyciszeniem docelowego genu. Nukleazy tego rodzaju mogą być dostarczane do komórek m.in. poprzez transdukcję wektorami wirusowymi. Jednakże, w niniejszej pracy połączono technikę edycji genomu z wykorzystaniem mikrofragmentów (ang. microvesicles – MVs), jako nośników nukleaz TALEN. MVs to małe pęcherzyki zewnątrzkomórkowe złuszczane z powierzchni błony komórkowej w stanach fizjologicznych oraz patologicznych. MVs zawierają bioaktywne molekuły takie jak mRNA, mikroRNA (miRNA) białka oraz lipidy, przez co uczestniczą w komunikacji międzykomórkowej. MVs funkcjonują jako naturalne nośniki cząsteczek między komórkami, odpowiadają za horyzontalny transfer informacji genetycznej oraz mogą powodować zmianę fenotypu komórek akceptorowych.Celem niniejszych badań było sprawdzenie czy mikrofragmenty wyizolowane ze zmodyfikowanych, ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z pępowiny (ang. human Umbilical Cord-derived Mesenchymal Stem Cells – hUC-MSC) mogą przenosić nukleazy TALEN do komórek wykazujących ekspresję białka EGFP i prowadzić do specyficznego wyciszenia genu EGFP. Przeprowadzono izolację, charakterystykę antygenów powierzchniowych, a następnie modyfikację komórek hUC MSC poprzez nukleofekcję plazmidowym DNA zawierającym gen TALEN. Zmodyfikowane genetycznie komórki hUC-MSC-TALEN wykazywały ekspresję nukleaz TALEN, która została potwierdzona na poziomie genomowego DNA, mRNA oraz białka. Wyizolowano mikrofragmenty z pożywek kondycjonowanych z hodowli hUC-MSC-TALEN, które to MVs zawierały mRNA specyficzne dla nukleaz TALEN. Transfer MVs-TALEN do komórek linii HEK293T z ekspresją pojedynczej kopii genu EGFP (HEK293T-EGFP) prowadził do wzrostu ilości transkryptów TALEN w komórkach docelowych. Ponadto, uzyskano wyciszenie genu EGFP po 10-dniowej kohodowli komórek hUC-MSC-TALEN z komórkami HEK293T EGFP.Przeprowadzone badania pokazują, że mikrofragmenty komórkowe mogą być wykorzystane jako nośniki materiału genetycznego do edycji genomu. MVs przenoszą mRNA nukleaz TALEN do komórek docelowych prowadząc do wyciszenia genu docelowego. Jednakże konieczne są dalsze badania dotyczące specyficznego pakowania materiału genetycznego do MVs oraz zwiększenia wydajności transferu do komórek docelowych.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 9.

Tytuł:: Genome editing of rhabdomyosarcoma cells with the CRISPR/Cas9 system
Edytowanie genomu komórek mięsaka prążkowanokomórkowego z zastosowaniem systemu CRISPR/Cas9
Autorzy:: Ulman, Aleksandra
Opis:: Edytowanie genomu stało się intensywnie badaną dziedziną nauki. Zdolność do precyzyjnego namierzenia sekwencji i trawienia w jej obrębie to głównie cechy obecnie używanych systemów, które mogą znaleźć zastosowanie w badaniu funkcji genów, etiologii chorób czy terapii genowych. System CRISPR/Cas9 (ang. clustered regularly interspaced short palindromic repeats) składa się z dwóch głównych elementów. RNA odpowiadającego za specyficzność i endonukleazy Cas9. W wyniku działania tego narzędzia powstają pęknięcia obu nici DNA, które w komórkach ssaczych mogą być naprawione poprzez: niehomologiczne łączenie końców (ang. non-homologous end joining - NHEJ) i rekombinację homologiczną (ang. homology directed repair – HDR). NHEJ generuje więcej błędów i często skutkuje w insercjach lub delecjach, co może doprowadzić nawet do wyciszenia ekspresji genu. Celem badań było wykorzystanie systemu CRISPR/Cas9 w celu inaktywacji genu SNAI1 w komórkach mięsaka prążkowanokomórkowego (RMS). SNAI1 jest represorem transkrypcji zaangażowanym w przejście epitalialno-mezenchymalne. Jest to proces istotny w rozwoju zarodkowym i progresji nowotworu. RMS jest często występującym u dzieci nowotworem tkanek miękkich. Typ pęcherzykowy nowotworu jest bardziej agresywny i wykazuje zwiększony poziom ekspresji SNAI1. Dlatego celem badań była modyfikacja genetyczna komórek RH30 – typu pęcherzykowego mięsaka prążkowanokomórkowego. Miała ona prowadzić do inaktywacji SNAI1. Przeprowadzono transfekcję komórek RH30, wykorzystując system CRISPR/Cas9 celujący w eksony 1 i 2 genu SNAI1. Wykonano izolację klonów z pojedynczych komórek. Przebadano 50 klonów, poprzez PCR na genomowym DNA w celu detekcji delecji w obrębie genu SNAI1. Poziom białka został zweryfikowany przy pomocy techniki Western blot. Udało się uzyskać jeden heteroalleliczny klon z obniżonym poziomem SNAI1 i zmienionym fenotypem w stosunku do komórek dzikich. Wyprowadzona linia komórkowa wykazuje wyższe tempo proliferacji od komórek typu dzikiego. Jest zdolna do wytworzenia guzów u myszy o podobnej morfologii i tempie wzrostu do guzów od RH30 WT (ang. wild type).
Genetic modifications are very intense developing field of science. Precise targeting and digestion of a sequence of interest are principal features of custom-nucleases which may find application in studying genes function, diseases ethology and gene therapy. CRISPR/Cas9 system consists of two major elements. RNA is responsible for specificity and digestion of the target is being performed by the Cas9 endonuclease. As a result of the enzyme activity we get double strand breaks (DSB), which could be repaired by non-homologous end joining (NHEJ) and homology directed repair (HDR). NHEJ is considered as more error prone and usually result in deletion or insertions. Therefore it might lead to knockout of targeted gene.The aim of our studies was to use CRISPR/Cas9 system to inactivate SNAI1 gene in rhabdomyosarcoma cells. SNAI1 is a repressor of transcription, which is engaged in epithelial-mesenchymal transition, an important process in human development and a deciding step in cancer progression. Rhabdomyosarcoma is a very common soft tissue tumour mostly occurring in children. Two forms of this cancer are known: embryonic and alveolar. The second one is usually more aggressive and displays an increased expression of SNAI1. Therefore the aim of the study was a genetic modification of RH30 alveolar rhabdomyosarcoma cell line. SNAI1 knockout cell line was a desired outcome.Firstly, we generated CRISPR/Cas9 nucleases targeting SNAI1 gene. Next, RH30 cells were transfected with the nucleases targeting SNAI1 gene in exon 1 and exon 2 and, subsequently, single cell clones were isolated. Fifty cell clones were screened. Deletion of SNAI1 gene fragment was evaluated by PCR using genomic DNA. SNAI1 protein expression level was verified by Western blotting. Only one SNAI1 heteroallelic clone with decreased protein level of SNAI1 was detected. The cells from this clone were elongated compared to control cells. Obtained cell line has a higher proliferation potential than wild type cells. It also forms tumours in mice displaying similar morphology and growth rate as RH30 WT.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 10.

Tytuł:: Optymalizacja metod detekcji mutacji w genie Nud indukowanej przez technologię CRISPR/Cas9 w jęczmieniu zwyczajnym (Hordeum vulgare L.)
Optimization of mutation detection methods in the NUD gene induced by CRISPR / CAS9 technology in barley (Hordeum vulgare L.)
Autorzy:: Przyborowski, Mateusz
Gasparis, Sebastian
Orczyk, Wacław
Nadolska-Orczyk, Anna
Tematy:: CRISPR / Cas9
edytowanie genomu
gen Nud
jęczmień zwyczajny
sondy molekularne
genome editing
Nud gene
barley
molecular probes; Pokaż więcej
Wydawca:: Instytut Hodowli i Aklimatyzacji Roślin
Powiązania:: https://bibliotekanauki.pl/articles/2199916.pdf Link otwiera się w nowym oknie
Opis:: Celem pracy był wybór optymalnej metody detekcji mutacji w genie Nud indukowanej z wykorzystaniem technologii CRISPR/Cas9 w jęczmieniu zwyczajnym. Testowano cztery powszechnie wykorzystywane techniki genotypowania: polimorfizm długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP), trawienie enzymatyczne przy użyciu endonukleazy I z bakteriofaga T7, wysokorozdzielczą krzywą topnienia produktu reakcji łańcuchowej polimerazy (HRM-PCR) oraz sondy molekularne. W toku prowadzonych prac stwierdzono, że najkorzystniejszym sposobem wykrywania mutacji indukowanej techniką CRISPR/Cas9 jest metoda oparta o sondy molekularne. Daje ona jednoznaczne i powtarzalne wyniki ale jednocześnie wymaga użycia zawansowanej aparatury.
The aim of the study was to select the optimal method for mutation detection in the Nud gene induced by using the CRISPR / Cas9 technology in barley. Four commonly used genotyping techniques were tested: restriction fragment length polymorphism (RFLP), enzymatic digestion using endonuclease I from T7 bacteriophage, high resolution melting curve of polymerase chain reaction product (HRM-PCR) and molecular probes. Findings in the current study suggest that the most favorable way for detecting mutations induced by the CRISPR / Cas9 technique is a method based on molecular probes. It enables to receive clear and repeatable results but at the same time requires the use of advanced equipment.
Dostawca treści:: Biblioteka Nauki

Artykuł

na półce

Informacja

Wyszukujesz frazę "genome editing" wg kryterium: Temat