Temat: neural differentiation

Skocz do pozycji: 1.

Tytuł:: Rola białka PrPc w procesie różnicowania neuralnego in vitro i neurogenezy
The role of PrPc protein in process of neural differentiation in vitro and neurogenesis
Autorzy:: Witusik, Monika
Liberski, Paweł P.
Tematy:: PRNP
PrP
PrPc
glial lineage
neural differentiation
neurogenesis
neuronal lineage
linia glejowa
linia neuronalna
neurogeneza
różnicowanie neuralne; Pokaż więcej
Wydawca:: Medical Communications
Powiązania:: https://bibliotekanauki.pl/articles/1059326.pdf Link otwiera się w nowym oknie
Opis:: The phenomena of neural differentiation in vitro and neurogenesis in vivo involve a numerous cellular proteins to create the differentiation signaling pathways. The role of the cellular isoform of prion protein PrPc – a product of the PRNP gene, seems also to be connected with a process of neural differentiation. The primary investigations in this field revealed increase of PRNP gene expression during both neurogenesis and neural differentiation in vitro; however, the majority of results were obtained with the use of animal models or cancer- derived cell lines. The latest experiments using neural stem/progenitor cells as an experimental models, seem to confirm the previous results, suggesting participation of PrPc in a neural differentiation. On the basis of the further analyses, PrPc appears to be a part of differentiation signaling pathways. Moreover, PrPc activity may contribute to acquire and maintain the functions specific for neurons. Surprisingly, the prion protein- -deficient cells are still able to differentiate into neurons, although the process of differentiation is delayed. The controversy nevertheless persists about expression of PRNP gene during glial cells differentiation that is reflected in inconsistent published results, beginning with hypothesis postulating the importance of “astrocytic” PrPc for neural differentiation, ending with data presenting no PrPc expression in glial lineage. Studying the literature data does not allow to create the uniform PRNP expression pattern during neural differentiation. It rather seems to be an individual feature, which should be considered in the broader context of particular cell type and the specificity of metabolic processes accompanying neural differentiation in vitro or neurogenesis in vivo.
Różnicowanie neuralne in vitro lub proces neurogenezy in vivo to zjawiska angażujące szereg białek komórkowych, będących ogniwami szlaków sygnalizacyjnych sterujących tymi procesami. Białkiem, którego funkcja również wydaje się związana z procesem różnicowania, jest białko prionu, izoforma komórkowa PrP1 - produkt genu PRNP. Pionierskie badania w tej dziedzinie ujawniły wzrost poziomu ekspresji genu PRNf podczas neurogenezy czy też różnicowania neuronalnego in vitro, aczkolwiek większość wyników uzyskane z wykorzystaniem modeli neurogenezy zwierząt lub linii komórkowych pochodzenia nowotworowego. Najnowsze badania, w których jako model eksperymentalny wykorzystywane są neuralne komórki macierzyste/progenitorowe, potwierdzają zarysowany uprzednio obraz, sugerując udział PrPc w różnicowaniu neuronalnym. Kolejne analizy, będące próbą sprecyzowania funkcji PrPc w tym zjawisku, ukazują to białko jako potencjalne ogniwo szlaków sygnalizacyjnych sterujących procesami różnicowania. Co więcej, wydaje się, iż PrPc jest białkiem, którego aktywność związana jest z nabywaniem oraz realizowaniem przez komórki funkcji specyficznych dla neuronów. Komórki pozbawione białka PrPc nadal są jednak zdolne do różnicowania neuronalnego, chociaż proces ten jest opóźniony. Kwestią kontrowersyjną jest natomiast ekspresja genu PRNP w trakcie różnicowania komórek glejowych, czego dowodem jest brak spójnych doniesień, poczynając od danych sugerujących, iż obecność PrPc w astrocytach jest niezbędna dla prawidłowego przebiegu różnicowania neuralnego, na wynikach definitywnie wykluczających obecność PrPc w linii glejowej kończąc. Analiza danych z literatury nie pozwala więc stworzyć uniwersalnego wzorca ekspresji genu PRNP w procesie różnicowania neuralnego. Wydaje się, iż jest to cecha, którą należy rozpatrywać indywidualnie dla danego typu komórek oraz konkretnego procesu metabolicznego, towarzyszącego zjawiskom tak złożonym, jak proces różnicowania neuralnego in vitro czy neurogeneza in vivo.
Dostawca treści:: Biblioteka Nauki

Artykuł

na półce

Skocz do pozycji: 2.

Tytuł:: Effect of Rho subfamily proteins inhibition on the expression of neuronal markers in NT2 cells
Wpływ inhibicji białek podrodziny Rho na ekspresję markerów neuronalnych w komórkach NT2
Autorzy:: Gawda, Tomasz
Opis:: NT2 cells when exposed to retinoic acid differentiate into neural cells, which extend characteristic protrusions and express neuronal markers. Differentiated cells are frequently used as a model of human neurons, but the differentiation process is rather time-consuming. NT2 cells can also extend projections when incubated with a Rho subfamily proteins inhibitor, C3 transferase. This process, being much faster than retinoic-acid-induced differentiation could be an alternative method of obtaining cells with a neural phenotype. In this thesis the presence of two neuronal protein markers, MAP2 and NeuN was tested, after NT2 cells were incubated with C3 transferase for 6 hours. The results of immunocytochemical staining against these two proteins showed that they are not present in examined cells. This suggests that morphological changes observed in NT2 cells after inhibition of Rho subfamily proteins are not necessarily a sign of neuronal differentiation.
Komórki NT2 różnicują pod wpływem kwasu retinowego do komórek o neuronalnym fenotypie, które tworzą charakterystyczne wypustki oraz wykazują ekspresję markerów neuronalnych. Są one często stosowane jako model ludzkich komórek nerwowych, jednak ich otrzymanie jest czasochłonne. Komórki NT2 mają zdolność tworzenia wypustek również podczas inkubacji z inhibitorem białek podrodziny Rho, C3 transferazą. Proces ten, istotnie krótszy niż różnicowanie z kwasem retinowym, mógłby być wykorzystany jako alternatywna metoda uzyskiwania komórek o neuronalnym fenotypie. W niniejszej pracy sprawdzano obecność dwóch markerów neuronalnych, MAP2 oraz NeuN w komórkach NT2 inkubowanych przez 6 godzin z C3 transferazą. Barwienia immunocytochemiczne z zastosowaniem przeciwciał przeciwko tym dwóm białkom wskazały na brak ich obecności w badanych komórkach. Zmiany morfologiczne obserwowane po inhibicji białek podrodziny Rho nie muszą zatem być związane z różnicowaniem komórek NT2 do neuronów.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 3.

Tytuł:: Przedtransplantacyjna optymalizacja funkcji mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej w celu zwi.ększenia potencjału regeneracyjnego.
The pre-transplant optimization of adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells for thier therapeutic potential enhancement
Autorzy:: Figiel-Dąbrowska, Anna
Współwytwórcy:: Sarnowska, Anna (Promotor)
Wydawca:: Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klincznej im. M. Mossakowskiego PAN
Opis:: Dynamiczny rozwój współczesnej medycyny regeneracyjnej jest możliwy miedzy innymi dzięki zastosowaniu komórek macierzystych. Ich terapeutyczne właściwości obejmują działanie troficzne, przeciwzapalne i immunomodulacyjne. Aktualny stan wiedzy dotyczący właściwości terapeutycznych komórek macierzystych pozwala odpowiednio dobrać źródło i sposób ich pozyskania, w zależności od schorzenia. Niemniej w większości przypadków, wciąż limitującym czynnikiem jest niewystarczająca liczba świeżo wyizolowanych komórek, prowadząca do konieczności namnożenia materiału w warunkach in vitro. Hodowla komórkowa związana jest ze starzeniem się komórek, prowadzącym do spadku proliferacji, ograniczenia właściwości troficznych i immunomodulacyjnych, a także do zwiększania prawdopodobieństwa uszkodzeń, w tym mutacji genetycznych, mogących prowadzić do transformacji nowotworowej. W związku z powyższym, konieczna jest optymalizacja warunków izolacji i długotrwałej hodowli komórek do celów terapeutycznych. Materiał do przeprowadzonych doświadczeń stanowiły dwie frakcje komórek pozyskanych z tkanki tłuszczowej: ludzkie mezenchymalne komórki zrębowe/macierzyste – ASC (adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells) otrzymane metodą enzymatyczną oraz odróżnicowane komórki tłuszczowe otrzymane metodą tzw. hodowli sufitowej – DFAT (dedifferentiated fat cells). Celem głównym przedstawionych badań była optymalizacja warunków hodowli komórkowej in vitro umożliwiająca pozyskanie odpowiedniej liczby komórek z jednoczesnym zachowaniem ich bezpieczeństwa biologicznego i pożądanych właściwości terapeutycznych. Do celów szczegółowych należały: charakterystyka obydwu populacji komórek macierzystych wywodzących się z tkanki tłuszczowej w zadanych warunkach środowiska, porównanie ich właściwości terapeutycznych (sekrecyjnych, ochronnych i repopulacyjnych), a także – w zakresie klinicznego zastosowania ASC – określenie skuteczności i mechanizmu działania. Przeprowadzone eksperymenty dotyczyły analizy fenotypu oraz właściwości ASC oraz DFAT hodowanych w różnych warunkach tlenowych – 5% O2 i 21% O2. Uzyskane wyniki potwierdziły mezenchymalny i multipotencjalny charakter obydwu analizowanych frakcji. Wykazano również, że hodowla w 5% stężeniu O2 w porównaniu do 21% O2, determinuje szybsze i jednocześnie stabilne tempo proliferacji z zachowaniem prawidłowej morfologii, wolniejszego wzrostu aktywności β-galaktozydazy, a także zmniejsza ryzyko transformacji nowotworowej. W przeprowadzonej analizie właściwości pluripotencjalne oceniane w zakresie ekspresji SRTF (stemnes-related transcriptional factors) były silniej wyrażone w komórkach DFAT. W modelu współhodowli badanych komórek z organotypową hodowlą skrawków hipokampa szczura potwierdzono ich neuroprotekcyjne działanie, potencjał do różnicowania w kierunku neuralnym oraz wydzielanie czynników przeciwzapalnych i wzrostowych. W oparciu o otrzymane dane przedkliniczne dotyczące mechanizmów oddziaływania ASC z uszkodzoną tkanką nerwową, przeprowadzono eksperymentalne podanie niepasażowanych komórek w trzech schorzeniach: wtórnym uwolnieniu nerwu po uszkodzeniu i nieudanej próbie rekonstrukcji,  stwardnieniu zanikowym bocznym oraz padaczce lekoopornej o podłożu autoimmunologicznym. Obserwacja, prowadzona około zabiegowo i przez okres kolejnych 5-lat, potwierdziła bezpieczeństwo zastosowanej terapii komórkowej, a także wskazała na konieczność powtarzania iniekcji komórek celem utrzymania osiągniętego efektu terapeutycznego. Uzyskane wyniki wskazują na zasadność terapii komórkowej opartej o ich właściwości wydzielnicze. Materiał do zastosowania klinicznego może zostać efektywnie namnożony in vitro, w warunkach stężenia tlenu zbliżonego do panującego w niszy komórek macierzystych. Warunki te umożliwiają długoterminowe utrzymanie komórek w stanie wysokiej aktywności proliferacyjnej przy jednoczesnym zapewnieniu stabilności genetycznej, co jest podstawowym warunkiem ich bezpieczeństwa biologicznego.
The dynamic development of regenerative medicine is possible, among others, due to the stem cells application. Their therapeutic effect include trophic, anti-inflammatory and immunomodulatory properties. The current state of knowledge about the stem cells' properties allows us properly select the source and method of obtaining cells to treat patients with a specific medical condition. Nevertheless, in most cases, the number of freshly isolated cells is still the restrictive factor leading to the need to multiply the material in vitro. Cell culture is still accompanied by the cell senescence that slows down their proliferation, decreasing of trophic and immunomodulatory properties, and finally increases the probability of damage and mutations in the genetic material of cells that can lead to neoplastic transformation. Therefore, further work is needed to standardize the isolation and long-term cell culture conditions. The cellular material for the conducted experiments were two cell fractions obtained from adipose tissue: mesenchymal stromal/stem cells (ASC) obtained by the enzymatic method, and differentiated fat cells (DFAT) by the so-called ceiling culture. The main aim of the conducted research was to optimize the in vitro conditions enabling the acquisition of an appropriate number of cells while maintaining their biological safety and the desired therapeutic properties. The detailed purposes included the characterization of both the above-mentioned adipose tissue-derived stem cell populations in the target groups of environmental conditions and the comparison of their therapeutic properties (secretory, protective and repopulation), including the verification of their mechanism of action and the clinical safety of their use. The conducted experiments included the property analysis of mesenchymal stem cells obtained from adipose tissue: ASC and DFAT cells’ cultivation in various aerobic conditions - 5% O2 and 21% O2.The obtained results confirmed the mesenchymal and multipotential nature of both analyzed fractions. Moreover, they also indicated that the conditions of 5% O2 compared to the 21% O2, determine a faster and simultaneously a stable rate of proliferation with the maintenance of normal morphology and a slower increase of β-galactosidase activity as well as a lower risk of neoplastic transformation. The pluripotent properties assessed in terms of SRTF (stemnes-related transcriptional factors) expression are more strongly expressed by DFAT was indicated. The protective effect of ASC and DFAT, the potential of these cells for neural differentiation and the secretion of anti-inflammatory and growth factors were confirmed in the co-culture model of studied cells with organotypic culture of rat hippocampal slices. Based on the obtained preclinical data on the mechanisms of ASC interaction in the environment of the damaged nervous tissue, an experimental administration of the non-passaged cells was carried out in three diseases: the secondary nerve release after a traumatic nerve injury and the unsuccessful reconstruction attempt, amyotrophic lateral sclerosis and autoimmune refractory epilepsy. The periprocedural and a 5-year follow-up, confirmed the safety of the used cell therapy and also indicated the need of cell injections repetition in order to maintain the achieved therapeutic effect. Observed cytokine release in CSF and reported clinical improvement of the patient persisting up to 3 months after cell administration. The obtained results have indicated the validity of mesenchymal stem cell therapy based on their secretory influence. Furthermore, the material for clinical application can be effectively multiplied in vitro under closed to physiological oxygen concentration in stem cell niche. This allows the long-term maintenance of cells in a state of high proliferative activity while ensuring genetic stability, which is the fundamental requisite of their biological safety during clinical application.
Dostawca treści:: RCIN - Repozytorium Cyfrowe Instytutów Naukowych

Inne

na półce

Skocz do pozycji: 4.

Tytuł:: Induced neural differentiation of ovarian Putative Stem Cells (PSCs): identification of selected protein markers
Indukowane różnicowanie neuralne potencjalnych komórek macierzystych (PSCs) jajnika: identyfikacja wybranych białek markerowych
Autorzy:: Krogulec, Aleksandra
Opis:: The work described below aims to demonstrate the ability of neural in vitro differentiation of ovarian Putative Stem Cells (PSCs). The Stemcell Technologies EasySep ™ kit was used for magnetic cell isolation. PSCs were cultured for 48 hours in DMEM/F12 with B-27 and SCF to maintain cells in undifferentiated state. Then for the next 7 days, PSCs were differentiated using forskolin and forskolin with b-FGF at concentrations: 10µM/ml and 10 ng/ml, respectively. After culture, the cells were fixed in order localization of nestin by immunofluorescence. Moreover, nestin was assessed at protein level by Western blot. Nestin is an intermediate filaments protein and serves as marker of neuronal cells.Morphology of cells in culture stimulated by differentiation factors and immunolocalization of nestin show that ovarian PSCs may differentiate into cells similar to neurons. The best result of differentiation was obtained by using forskolin and b-FGF at the same time. The confirmation of pluripotency of ovarian PCSs on the basis of neural differentiation serves as one of their many characterizations, and may provide the bridge to a wide range of therapeutic applications. Further studies of the character and transformative capabilities of PSCs are recommended.
Celem przedstawionej pracy licencjackiej jest określenie zdolności do różnicowania w kierunku neuronalnym potencjalnych komórek macierzystych jajnika (ang. Putative Stem Cells; PSCs) in vitro. Do izolacji PSCs z zawiesiny enzymatycznie trawionej kory jajnika świni zastosowano metodę magnetycznego sortowania komórek z użyciem zestawu EasySepTM firmy StemcellTM Technologies. Uzyskane PSCs sortowano względem obecności markera pluripotencji SSEA-4 na ich powierzchni. Po 48 godzinach hodowli wstępnej przeprowadzono 7-dniową hodowlę różnicującą w kierunku neuralnym. Zastosowano dwa protokoły różnicowania: część komórek zostało poddane działaniu forskoliny (10µM/ml), część komórek poddano jednoczesnemu działaniu forskoliny (10µM/ml) z dodatkiem czynnika wzrostu fibroblastów (ang. basic Fibroblast Growth Factor – b-FGF; 10 ng/ml). W 7 dniu hodowle zakończono i komórki z każdej grupy eksperymentalnej przeznaczono do analizy morfologicznej oraz analizy specyficznego markera komórek neuralnych: nestyny, na poziomie białka (Western blot, analiza immunofluorescencyjna). Otrzymane wyniki pozwalają stwierdzić, że zastosowane metody różnicowania PSCs jajnika w kierunku neuralnym wydają się potwierdzać charakter pluripotencjalny domniemanych komórek macierzystych jajnika. Zmiany w morfologii oraz obecność nestyny potwierdzona immunofluorescencyjnie w PSCs hodowanych w obecności forskoliny oraz forskoliny wraz z b-FGF stanowią początek badań nad potencjałem do różnicowania komórek macierzystych jajnika. Zróżnicowanie w przyszłości dorosłych komórek macierzystych jajnika, jakimi są PSCs, w komórki nerwowe o dwóch kluczowych funkcjach takich jak: neurony motoryczne i dopaminergiczne wydaje się być priorytetowe dla zrozumienia procesów regulujących różnicowanie, które w przyszłości może otworzyć drogę do zastosowania PSCs w medycynie regeneracyjnej.
Dostawca treści:: Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego

Inne

na półce

Informacja

Wyszukujesz frazę "neural differentiation" wg kryterium: Temat