- Tytuł:
-
Evaluation of DNA damage proteins in IMR-32 cells treated with ch14.18/CHO antibodies
Ocena poziomu białek związanych z uszkodzeniami DNA w komórkach IMR-32 traktowanych przeciwciałami ch14.18/CHO - Autorzy:
- Gallagher, Keelan
- Opis:
-
(Translated via online resource)Nerwiakowłókniakowatość (neuroblastoma) to forma raka występująca głównie u dzieci poniżej piątego roku życia, stanowiąca do 10% wszystkich przypadków raka u dzieci. Neuroblastoma wysokiego ryzyka wiąże się z mniej niż 50% wskaźnikiem przeżycia i wymaga inwazyjnego protokołu interwencji w celu leczenia. Niniejsza praca magisterska ma na celu zbadanie ekspresji genów i profilu białkowego odpowiedzi na uszkodzenie DNA linii komórkowej nerwiaka niedojrzałego IMR-32 na leczenie przeciwciałem ch14.18/CHO. Przeciwciało to jest hodowane przeciwko antygenowi gangliozydowemu GD2, który ulega nadekspresji w komórkach neuroblastoma. Procedura eksperymentalna obejmowała test ATP w celu oceny zmian w żywotności komórek po leczeniu przeciwciałem, a także metodami qPCR i western blotting w celu określenia odpowiednio zmian w ekspresji genów i poziomach białek. Stwierdzono, że leczenie przeciwciałem ch14.18/CHO wiąże się ze statystycznie istotnym zmniejszeniem żywotności komórek do 68%, o czym świadczą wyniki testu ATP w porównaniu z komórkami kontrolnymi. Nie stwierdzono statystycznie istotnej zmiany poziomu ekspresji genu ATR po ocenie qPCR komórek traktowanych przeciwciałem ch14.18/CHO. Pomimo tego nastąpił wzrost poziomu ATR, podczas gdy nie uwidoczniono żadnych zmian w poziomie białka fosforylowanego. Podczas gdy nastąpił wzrost poziomu p-CHK1, stwierdzono niewystarczający sygnał dla natywnej formy CHK1 p53 i BRCA1, co uniemożliwiło analizę. Wyniki wskazują na zmianę w wybranych białkach w szlaku odpowiedzi na uszkodzenie DNA; jednak ogólne ustalenie jest takie, że szlak uszkodzenia DNA musi być dalej badany w odpowiedzi na wiązanie przeciwciał ch14.18/CHO.
Neuroblastoma is a form of cancer predominantly found in children under the age of five, comprising up to 10% of all paediatric cancer cases. High-risk neuroblastoma is associated with less than a 50% survival rate and involves an invasive intervention protocol to treat. The work of this thesis is to investigate the gene expression and protein profile of the DNA damage response of the IMR-32 neuroblastoma cell line to ch14.18/CHO antibody treatment. This antibody is raised against the GD2 ganglioside antigen which is overexpressed in neuroblastoma cells. The experimental procedure comprised of an ATP assay to assess changes in cell viability following antibody treatment, as well as by qPCR and western blotting methods to determine changes in gene expression and protein levels respectively. It was found that ch14.18/CHO antibody treatment is associated with a statistically significant reduction to 68% of cell viability as evidenced by the ATP assay results when compared with control cells. There was no statistically significant change in the level of ATR gene expression following qPCR assessment of ch14.18/CHO antibody treated cells. Despite this, there was an increase in the levels of ATR, while no changes in protein levels of phosphorylated were visualised. While there was an increase in the levels of p-CHK1, an inadequate signal was found for the native form of CHK1 p53 and BRCA1, preventing analysis. The results show a change in selected proteins in the DNA damage response pathway; however, the overall determination is that the DNA damage pathway must be further investigated in response to ch14.18/CHO antibody binding. - Dostawca treści:
- Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Inne