- Tytuł:
-
The effect of doxorubicin on the expression levels of the genes CDKN1A, RPS27L and SESN-1 in the IMR-32 neuroblastoma cell line
Wpływ deksorubicyny na poziom ekspresji genów CDKNIA, RPS27L i SESN-1 w komórkach ludzkiej linii neuroblastoma IMR-32 - Autorzy:
- Górka, Anna
- Opis:
-
Neuroblastoma jest nowotworem złośliwym i najczęstszym pozaczaszkowym guzem litym wieku wczesnodziecięcego. W komórkach tego nowotworu nie występuje mutacja białka P53, odpowiedzialnego m.in. za aktywację transkrypcji genów CDKN1A, RPS27L oraz SESN-1. Kodowane przez nie białka, odpowiednio P21, RPS27L oraz sestryna-1 są zaangażowane w regulację cyklu komórkowego.Wpływ doksorubicyny, chemioterapeutyku powszechnie stosowanego w terapii neuroblastoma, na poziom ekspresji genów CDKN1A, RPS27L i SESN-1 oraz białek RPS27L i sestryny-1 analizowano w ludzkich komórkach neuroblastoma IMR-32. Stosowano różne stężenia i czasy traktowania komórek lekiem. Wykonane badania miały na celu zweryfikowanie wyników otrzymanych techniką mikromacierzy cDNA. Przy pomocy metod półilościowych: RT-PCR oraz Western-blot oceniano, odpowiednio, poziom transkryptów i białek, a obie te techniki uprzednio optymalizowano.Otrzymane wyniki wykazały wpływ cytostatyku na poziom ekspresji genów CDKN1A, RPS27L oraz SESN-1. Wraz ze wzrostem stężenia doksorubicyny po 24 godzinach traktowania komórek lekiem wzrasta względny poziom ekspresji badanych genów. Po tym samym czasie przyrasta również poziom ekspresji białka RPS27L, natomiast takich zmian nie udało się wykazać w przypadku sestryny-1. Po 8 i 16 godzinach traktowania komórek lekiem, doksorubicyna nie wpływa na ekspresję sestryny-1.Uzyskane wyniki wymagają potwierdzenia metodami ilościowymi, takimi jak RT-PCR w czasie rzeczywistym i ELISA, które umożliwiłyby zaobserwowanie nawet niewielkich zmian w poziomie, odpowiednio, transkryptów CDKN1A, RPS27L i SESN-1 oraz białek RPS27L i sestryny-1.
Neuroblastoma is the most common extracranial pediatric solid tumor. The wild-type P53 in neuroblastoma cells regulates the transcription of the CDKN1A, RPS27L and SESN-1 genes, which encode P21, RPS27L and sestrin-1 proteins, respectively. All of the mentioned proteins are engaged in the cell cycle control.Doxorubicin is a chemotherapeutic drug which is used in the therapy of neuroblastoma patients. In the research, the IMR-32 cells were treated with the drug and expression levels of transcripts of the genes CDKN1A, RPS27L and SESN-1, as well as levels of the RPS27L and the sestrin-1 proteins were evaluated using semiquantitative methods: RT-PCR and Western blot. Both of these techniques were previously optimized. Different concentrations of the doxorubicin and various times of incubation of the IMR-32 cells with the drug were used. The purpose of the study was to verify the previously performed microarrays.The result of study have shown that the treatment with the doxorubicin influenced the levels of transcripts of all the genes analyzed. 24 hours after the drug addition to the culture media, the relative levels of the CDKN1A, RPS27L and SESN-1 genes expression increases together with the growing concentration of the doxorubicin. After the same time of incubation, the content of the RPS27L protein was also rising, but the level of the sestrin-1 protein was not changing. Additionally, the doxorubicin did not influence the sestrin-1 protein expression after 8 and 16 hours of the incubation.The presented data needs to be confirmed by quantitative methods, such as qRT-PCR and ELISA, which are capable of detecting even more subtle changes in transcript and protein levels, respectively. - Dostawca treści:
- Repozytorium Uniwersytetu Jagiellońskiego
Inne